[发明专利]一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法

权利要求书

1.一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

一、取多个婴儿胎盘，在无菌条件下使用0.9％的氯化钠溶液逐个冲洗1-2min，将得到的冲洗液A进行检测，并标记相对应的胎盘；

二、取其中一个检测合格的冲洗液，并将其相对应的婴儿胎盘使用0.9％的氯化钠溶液冲洗6-8min，得到冲洗液B；

三、将冲洗液A和冲洗液B混合、过滤，得到滤渣，将滤渣进行冷冻；

四、将步骤二得到的婴儿胎盘使用消毒后的医用剪刀剪碎，然后用酶解液消化胎盘组织，消化时间为30-40min；

五、将步骤四得到的酶解后的组织过滤2-3次，分别得到滤液和滤渣，将滤液静置5-10小时，取出上清液，得到细胞悬液；

六、将步骤三得到的冷冻物取出，自然融化至0-5℃，将其和步骤五中的细胞悬液混合，然后在混合物中加入步骤五中的滤渣，搅拌混合后静置2-3小时，取出上层的上清液，将得到的细胞悬液备用；

七、将步骤六得到的细胞悬液使用离心机一次离心，取出上清液，加入培养基中1-2小时，再使用离心机二次离心，取出上清液，得到造血干细胞。

2.根据权利要求1所述的一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法，其特征在于，所述步骤三中的冷冻时间3-5天，冷冻时间-10℃，且每0.5天降温3℃。

3.根据权利要求1所述的一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法，其特征在于，所述步骤四中的剪碎后的胎盘块的长和宽均小于8-12mm。

4.根据权利要求3所述的一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法，其特征在于，所述步骤四中的酶解液为胰蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶的一种或者多种。

5.根据权利要求1所述的一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法，其特征在于，所述步骤七中的一次离心时间为30-35min，转速为1200-1400r/min。

6.根据权利要求5所述的一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法，其特征在于，所述步骤七中的培养基中含有DEME和F12混合液。

7.根据权利要求6所述的一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法，其特征在于，所述步骤七中的二次离心时间为10-15min，转速为300-500r/min。