[发明专利]一种露湿漆斑菌A553抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1及其应用

说明书

本发明公开了一种露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)A553抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1及其应用。该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明以转录组测序结果预测基因序列，以cDNA文库为模板，扩增获得露湿漆斑菌A553抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1。本发明的抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1能够高效协助酿酒酵母抵抗单端孢霉烯毒素，为后期提高酿酒酵母抗单端孢霉烯的能力，提升单端孢霉烯毒素的异源表达水平并获得新型单端孢霉烯毒素奠定分子生物学基础。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种露湿漆斑菌A553抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1及其应用。

背景技术

露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)A553是一株从广药植物广藿香中分离得到的真菌，从其发酵液中分离得到了新型化合物单端孢霉烯毒素，具有很强的抗肿瘤活性。从露湿漆斑菌A553中共获得单端孢霉烯毒素3种，其中1种为新型单端孢霉烯毒素。单端孢霉烯毒素具有抗肿瘤、抗真菌、抗疟疾和植物毒活性，因此在抗肿瘤、抗真菌感染和抗疟疾等药物开发方面具有良好的研究前景。

单端孢霉烯的毒性主要源于靶向真核细胞中普遍保守的Rpl3，并抑制蛋白合成，所以它不仅对动植物细胞，而且对宿主菌也有毒性。已有报道宿主菌体内存在某种机制抵抗单端孢霉烯对它的毒性，而这种机制的引入对提高工业化生产菌株对毒素的耐受极为关键。禾谷镰刀菌中单端孢霉烯毒素的生物合成基因簇已经被报道，已证实基因簇中的Tri12和Tri101基因涉及到了宿主对单端孢霉烯产生的抗性，但它们并不是唯一的机制。已有文献研究表明，菌株的mfs1类基因(major facilitator superfamily I)是宿主自我保护机制的重要组成部分。(Qinhu Wang,Daipeng Chen,Mengchun Wu,Jindong Zhu,Cong Jiang,Jin-Rong Xu and Huiquan Liu.MFS Transporters and GABA Metabolism Are Involvedin the Self-Defense Against DON in Fusarium graminearum.Frontiers in PlantScience.April 2018,Volume 9,Article 438)

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1，所述的抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1通过以下方法获得的：通过转录组测序结果预测编码抗单端孢霉烯自我保护基因mfs1的序列，在其上下游设计特异性引物，其引物序列为msf1-F:5'-ATGTTTATCGCCGCCCGTGT-3'；mfs1-R:5'-TTAATCAAGAGGCCCACCCGT-3'，以由露湿漆斑菌A553转录组反转录而得的cDNA文库为模板，通过PCR扩增获得产物并纯化回收片段，获得目的基因mfs1(其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)。