[发明专利]一种简易高效的葛根多倍体诱导方法有效
| 申请号： | 201911177417.4 | 申请日： | 2019-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN110731266B | 公开（公告）日： | 2020-06-23 |
| 发明（设计）人： | 严华兵;曾文丹;尚小红;肖亮;曹升;陆柳英;谢向誉 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院 |
| 主分类号： | A01H1/08 | 分类号： | A01H1/08;A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京天奇智新知识产权代理有限公司 11340 | 代理人： | 王雪 |
| 地址： | 530007 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 简易 高效 葛根 多倍体 诱导 方法 | ||
1.一种简易高效的葛根多倍体诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，先用0.1％升汞浸泡消毒6-10min，然后用无菌水冲洗4-5次，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；
S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成单芽茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养28-30d，获得无菌苗；
S3.丛生芽诱导：在无菌条件下，将无菌苗转接到丛生芽诱导培养基中培养20-25d，获得丛生芽；
S4.茎节培养：在无菌条件下，将丛生芽转接到茎节伸长培养基中培养25-30d，获得茎节较长的葛根组培苗；
S5.多倍体诱导：在无菌条件下，将茎节较长的葛根组培苗先切成单芽茎段转接到诱导剂液体培养基中进行震荡培养48h-72h；
S6.嵌合体分离：在无菌条件下，将经过S5处理的单芽茎段用无菌水冲洗干净，然后转接到嵌合体分离培养基上培养，然后挑选变异植株将其单芽茎段用茎节伸长培养基连续进行4-6次的继代培养；
S7.纯系筛选：取经过S6培养的整株叶片，进行倍性鉴定，筛选出多倍体纯系材料；
S2中所述初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，初始培养基pH为5.8；
培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d；
S3中所述丛生芽诱导培养基为：MS基本培养基+0.02mg/L6-BA+0.02mg/L NAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，初始培养基pH为5.8；
培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d；
S4中所述茎节伸长培养基为：MS基本培养基+0.01-0.05mg/L IAA+0.01-0.05mg/L NAA+0.01-0.02mg/L GA3+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，初始培养基pH为5.8；
培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d；
S5中所述诱导剂液体培养基为：MS基本培养基+质量百分数为0.6-0.8％秋水仙素，初始培养基pH为5.8；
培养条件为：震荡频率100-220r/min，温度25±1℃，黑暗；
S6中所述嵌合体分离培养基为：MS基本培养基+0.01-0.05mg/L IAA+0.01-0.05mg/LNAA+0.01-0.02mg/L GA3+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，初始培养基pH为5.8；
培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d。
2.根据权利要求1所述的葛根多倍体诱导方法，其特征在于，S7中倍性鉴定采用染色压片法和流式细胞仪，筛选出多倍体纯系材料之后对其进行扩繁、壮苗生根及移栽成活。
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