[发明专利]一种用于评估先天肤质的五大基因组合的检测方法及根据检测结果制定的个人化护肤套盒

权利要求书

1.一种用于评估先天肤质的五大基因组合的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

Step 1、检测与先天肤质相关的五大基因组合的基因型，包括皮肤先天抗氧化能力、抗糖化能力、胶原蛋白合成能力、抗紫外能力以及发炎控制能力相关的基因位点；其中，

所述与先天肤质相关的五大基因中先天抗氧化能力相关基因为SOD2，其有效SNP位点为RS4880；

所述与先天肤质相关的五大基因中先天抗糖化能力相关基因为AGER，其有效SNP位点为RS1800624；

所述与先天肤质相关的五大基因中先天胶原蛋白合成能力相关基因为MMP3，其有效SNP位点为RS522616；

所述与先天肤质相关的五大基因中先天抗紫外线能力相关基因为XRCC1，其有效SNP位点为RS2139720；

所述与先天肤质相关的五大基因中先天发炎控制能力相关基因为IL-13，其有效SNP位点为RS848；

Step 2、根据步骤Step 1检测项目设计相应检测步骤进行五大基因组合检测，结合检测结果及数据库比对判定先天薄弱肌肤问题，指导受检者选择适配的护肤品原料。

2.根据权利要求1所述的一种用于评估先天肤质的五大基因组合的检测方法，其特征在于：所述步骤Step 2中，所述五大基因组合检测步骤包括：

(1)采集受检者口腔粘膜上皮细胞：通过无创口腔粘膜上皮细胞采集方式，在采集前20min-30min用饮用水漱口，清除口腔中的杂物，再用棉拭子在腮帮内侧进行刮拭，刮取10-20下，在空气中稍微晾干1-2min后放入收集管中以供检测；

(2)提取受检者基因组DNA样本：将在面颊内刮拭的棉拭子转置于1.5mL-2mL离心管中，用剪刀将棉拭子部分从其杆上剪下，加入300μL-400μL缓冲液，加入4μL-5μL RNase A，振荡10s-15s，室温放置3min-5min；加入10μL-20μL Proteinase K溶液，涡旋5s-10s混匀，50℃-56℃放置30min-60min，其间每10min-15min涡旋混匀数次；加入300μL-400μL沉淀蛋白的缓冲液，充分颠倒混匀，60℃-70℃放置5min-10min；加入150μL-200μL无水乙醇，充分颠倒混匀，简短离心以去除管内壁的液滴；

将前述所得所有溶液加入到吸附柱中，10000rpm-12000rpm离心15s-30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中；向吸附柱中加入400μL-500μL洗涤缓冲液，10000rpm-12000rpm离心15s-30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中；向吸附柱中加入500μL-600μL漂洗液，10000rpm-12000rpm离心15s-30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中；10000rpm-12000rpm离心1min-2min，倒掉废液，将吸附柱室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；向吸附柱转入一个干净的离心管，向吸附膜中间位置悬空滴加20μL-50μL洗脱缓冲液，室温放置2min-5min，10000rpm-12000rpm离心1min-2min，-20℃保存备用；

(3)利用相应位点荧光探针引物及试剂盒进行PCR扩增：其中，PCR反应体系为TaqPathProAmp Master Mix 10.25μL-12.5μL，20x TaqMan SNP Genotyping Assay 1.0μL-1.25μL,Genomic DNA-or-NTC 10.25μL-11.25μL,Nuclease-Free Water加至20μL-25μL；PCR反应程序为前读取55℃-60℃ 20s-30s，预变性95℃-98℃ 3min-5min，变性95℃-98℃ 10s-15s，退火55℃-60℃ 30s-60s，后读取55℃-60℃ 20s-30s，循环35-40次；

(4)检测实验结果分析：用QuantStudio^TM Design&Analysis Software进行分析，根据不同的荧光信号，得出对应SNP位点的基因型。