[发明专利]一种石斑鱼孵化过程中去除卵膜的方法

说明书

本发明提供一种石斑鱼孵化过程中去除卵膜的方法，包括以下步骤：低渗处理、搅拌脱粘、孵化脱膜、卵膜收集，本发明的石斑鱼在孵化过程中去除卵膜的方法，科学调节pH值、水温及培养剂的比例，有效处理卵膜，在不避免影响水质的条件下达到最大脱膜率，分离出的相对比较完整卵膜已可以满足需求，对推动石斑鱼基于卵膜相关的研究具有积极重要的意义。

技术领域

本发明涉及生物除膜领域，特别涉及一种石斑鱼孵化过程中去除卵膜的方法。

背景技术

卵膜是包裹动物卵细胞的非细胞性被膜的总称，不同动物的卵膜，其形态结构及组成也大不相同，卵膜在卵细胞的保护和精卵识别过程发挥重要的作用。软体动物作为仅次于节肢动物的最大无脊椎动物类群，其卵膜结构呈现多样化的结构，总体来看其卵膜较厚，不易分离。

石斑鱼卵和具卵膜丝鱼卵卵膜较厚，最外端具有一定厚度的复杂多层蛋白壳，并且卵膜和细胞质膜紧密贴合，分离和溶解也卵膜比较困难，这对石斑鱼卵膜结构研究带来诸多不便。目前，针对鱼卵除膜使用物理脱膜会破坏鱼卵，采用化学制剂会降低鱼卵的存活率，对石斑鱼卵膜分离效果都不好。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种石斑鱼孵化过程中去除卵膜的方法，解决上述问题。

本发明的技术方案是这样实现的：一种石斑鱼孵化过程中去除卵膜的方法：包括以下步骤：

S1、低渗处理：在孵化池中加入磷酸缓冲盐溶液进行漂洗，磷酸缓冲盐溶液与卵细胞的体积比为30～35：17～20，漂洗2～4次后浸泡卵细胞，在24～30℃混匀静置6～15min；

S2、搅拌脱粘：将鱼卵放入泥浆内进行搅拌10～30min脱粘后取出，泥浆为泥土和水按1:5～8的比例混合搅拌均匀，过80～100目筛，放入孵化池中，进行水流冲洗，水流速度为1～2.4m/s，水压为0.03～0.07MPa；

S3、孵化脱膜：加入孵化培养剂，调节pH值为5～8，水温28～34℃，孵化20～28h，再加入孵化培养剂，调整pH值为5.7～8.5，水温28～34℃，培养50～75h，所述孵化培养剂为质量浓度比(0.1～3)：(0.1～3)：(0.5～5)：(1～7)的丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、茶多酚、植酸；

S4、卵膜收集：将上述置于40～60um孔径的细胞筛上，用灭菌的过滤海水反复冲洗1～3次，灭菌海水的盐度为35～40‰，温度为20～28℃，除去卵黄物质，收集沉淀即为卵膜，吸取到离心管中2～4℃保存。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明提供的石斑鱼在孵化过程中去除卵膜的方法较为温和，经低渗处理、搅拌脱粘、孵化脱膜、卵膜收集等方式，使用渗透原理，将卵细胞吸水膨胀，与卵膜脱离，使用泥浆进行搅拌，利用泥浆的粘性结合水流速度和水压控制，使具有弹性、韧性的卵膜在冲击强度的作用下将卵膜进一步自然脱落，同时，在孵化过程中加入培养剂，调节pH值，使鱼卵膜呈皱缩状态，不影响鱼卵孵化的条件下，加入具有抗氧化性的培养剂，防止卵膜发生氧化反应，增加脱膜的厚度，从而不易脱落；本发明分离出的相对比较完整卵膜可以满足需求，对推动石斑鱼基于卵膜相关的研究具有积极重要的意义。

具体实施方式

为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。

本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

一种石斑鱼孵化过程中去除卵膜的方法：包括以下步骤：

S1、低渗处理：在孵化池中加入磷酸缓冲盐溶液进行漂洗，磷酸缓冲盐溶液与卵细胞的体积比为30：17，漂洗2次后浸泡卵细胞，在24℃混匀静置6min；