[发明专利]食源性小肠结肠炎耶尔森菌的LAMP检测试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201911180875.3 | 申请日： | 2019-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN110734992A | 公开（公告）日： | 2020-01-31 |
| 发明（设计）人： | 胡青海;王西;胡仲浩;谭攀攀;杜晓莉;徐欣欣;王权;刘光清 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 31276 上海序伦律师事务所 | 代理人： | 周东萍 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小肠结肠炎 食源性 引物 食品安全监测 检测灵敏度 基因设计 试剂盒 检测 可视 应用 基层 | ||
1.一种食源性小肠结肠炎耶尔森菌的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含特异性针对食源性小肠结肠炎耶尔森菌ail基因设计的引物，所述引物包括SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、以及SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含10×ThermoPol反应缓冲液、dNTP混合液、MgSO4溶液。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含DNA聚合酶。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含显色试剂。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用等温扩增进行检测反应。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述等温扩增的步骤包括：60℃～70℃恒温孵育50～70分钟，80℃～90℃灭活3～8分钟。
7.一种用于食源性小肠结肠炎耶尔森菌LAMP检测的引物，其特异性扩增食源性小肠结肠炎耶尔森菌ail基因，所述引物包括SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、以及SEQ ID NO.4和SEQID NO.5。
8.权利要求1所述LAMP检测试剂盒的应用，用于对食品进行食源性小肠结肠炎耶尔森菌的检测。
9.权利要求1所述LAMP检测试剂盒的应用，用于实验室对食源性小肠结肠炎耶尔森菌进行鉴定。
10.一种对食品进行食源性小肠结肠炎耶尔森菌检测的方法，包括以下步骤：
食品的采样和增菌培养；
增菌样品DNA提取；
采用权利要求1所述LAMP检测试剂盒对样品DNA进行检测；
结果判定：肉眼观察反应管中反应液是否有沉淀，如果有沉淀，表明食品含有食源性小肠结肠炎耶尔森菌；或在紫外灯下观察反应液的颜色，如果呈现黄绿色荧光为阳性。
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