[发明专利]一种靶向抑制食管癌EGFL6基因表达的siRNA及构建的表达载体和应用在审
| 申请号： | 201911181942.3 | 申请日： | 2019-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN110951733A | 公开（公告）日： | 2020-04-03 |
| 发明（设计）人： | 王艳红;亢晶;王娟娟;田继华;藏好晶;杨佳;王桂琴;常思佳;冀贺 | 申请（专利权）人： | 山西医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;A61K31/713;A61P35/00 |
| 代理公司： | 太原晋科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 14110 | 代理人： | 翟冲燕 |
| 地址： | 030001 *** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 靶向 抑制 食管癌 egfl6 基因 表达 sirna 构建 载体 应用 | ||
1.一种靶向抑制食管癌细胞EGFL6基因表达的siRNA，其特征在于：所述siRNA为双链，标记为si EGFL6 ，序列为：
正义链：5' GGAAGCUACUACUGCAAAUTT 3'；反义链：5' AUUUGCAGUAGUAGCUUCCTT 3'。
2.一种靶向抑制食管癌细胞EGFL6基因表达的RNA干扰重组慢病毒载体，其特征在于：根据权利要求1所述的siRNA序列，合成编码shRNA 的双链DNA片段，然后将其连接到自身失活的第三代慢病毒载体pLKO.1 puro的多克隆位点中，构建重组慢病毒载体。
3.根据权利要求2所述的一种靶向抑制食管癌细胞EGFL6基因表达的RNA干扰重组慢病毒载体，其特征在于：具体构建方法为：
（1）根据所述的siRNA序列，合成编码shRNA 的DNA模板单链的正义链和反义链，序列为：sh EGFL6-1 正义链：5' -CCGG GGAAGCUACUACUGCAAAUTT TTCAAGAGAUAAACGUCAUCGAAGGAA TTTTTTT GGTACC— 3' ；
sh EGFL6-2 反义链：5'-AATT GGTACC AAAAAA TTCCUUCGAUGAUGACGUUUA TCTCTTGAAAAATTGCAGTAGTAGCTTCC-3' ；
（2）将编码shRNA 的DNA模板单链的正义链和反义链退火形成双链DNA 片段，连接到pLKO.1 puro慢病毒载体的多克隆位点中，构建重组慢病毒载体pLK sh EGFL6；
（3）再以所述重组慢病毒载体pLK sh EGFL6联合第二代慢病毒包装质粒pCMV-dR8.2dvpr和膜蛋白表达质粒pCMV-VSV-G共转染293T细胞，获得包装的重组慢病毒载体。
4.根据权利要求3所述的一种靶向抑制食管癌细胞EGFL6基因表达的RNA干扰重组慢病毒载体，其特征在于：步骤（2）中具体方法为：在双链DNA片段的末端引入与Age I 和EcoR I酶切载体位点相连接的黏末端，并以Age I 和EcoRI 酶切pLKO.1 puro慢病毒载体，回收大片段与所述双链DNA片段连接后转化感受态菌，挑取重组阳性克隆。
5.权利要求2所述的靶向抑制食管癌细胞EGFL6基因表达的RNA干扰重组慢病毒载体在制备治疗食管癌的药物中的应用，其特征在于：所述重组慢病毒载体为靶向抑制食管癌细胞EGFL6基因表达。
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