[发明专利]一种免疫层析试纸条的高灵敏检测方法

说明书

本发明公开了一种免疫层析试纸条的高灵敏检测方法，将金属纳米粒子与抗体混合连接后，与待测细菌混合进行特异性捕捉，随后滴加到免疫层析试纸条上与其检测线处的抗体再次捕捉，实现待测细菌的稳定沉积，利用等离子体发射光谱检测系统检测免疫层析试纸条检测线处金属纳米粒子的浓度，进而得到待测细菌的浓度。本发明所提供的方法通过结合等离子体发射光谱技术，有效避免了视觉比色的误差并实现定量化检测，检测限提高了约4个数量级；且无需辅助试剂添加和复杂前处理流程，检测速度快，灵敏度高；本发明将传统的免疫试纸条与等离子体光谱技术相结合，提高了免疫层析试纸条的灵敏度，拓宽了光谱学的应用。

技术领域

本发明涉及食品安全免疫检测技术领域，更具体地，涉及一种免疫层析试纸条的高灵敏检测方法。

背景技术

免疫试纸条技术是一种新型的免疫层析技术，对致病菌、重金属污染、食品污染物和非法添加剂等进行检测，通过可视化比色可用于间接定性或半定量的检测。免疫试纸条技术操作简便、快速，检测特异性强、灵敏度高，无需特殊仪器设备，对检测人员要求较低，适合于临床医学、实验室、现场快速诊断及家庭的自我检测，已被广泛的应用于对微生物、农药残留、重金属等类别的食品、药品、化工、生物、临床医学诸多领域的检测，具有良好的发展前景。

为了满足食品安全、环境监测和疾病诊断等对检测方法速度和灵敏度的需求，研究工作者构建了大量免疫传感器，如微流控免疫传感器、磁免疫传感器，胶体金免疫分析等。其中，微流控免疫传感器与磁免疫传感器具有较高的灵敏度，然而，由于样品处理和试剂反应等过程复杂，检测周期长，该类传感器在现场检测方面的应用较少。

近年来，基于胶体金免疫层析试纸条构建了大量快速检测方法。传统的胶体金试纸条检测法基于条带的可视化进行目标物的检测，通过试纸条检测线的条带颜色深浅反应待测物浓度，操作简单、快速，检测特异性强，但由于人眼分辨误差大，该免疫试纸条对目标物的检测灵敏度较低，对于细菌的检测限为10⁵-10⁶CFU/mL。与相关国家标准对照，传统的胶体金试纸条检测法已无法满足细菌总数的限值为50CFU/mL的要求。

申请号为201510817001.X的中国发明专利申请提出了一种以金黄色葡萄球菌适配体修饰磁纳米颗粒表面，该材料可以快速识别并捕获待测样品中的金黄色葡萄球菌，将捕捉到的金黄色葡萄球菌与另外一条荧光标记的适配体进行结合，实现夹心结构的荧光标记；将夹心结构复合体注射入毛细管中，利用磁场进行富集；撤掉磁场，以恒定流速推进复合体通过激光诱导荧光检测池得到一定的荧光峰面积，得出金黄色葡萄球菌浓度与荧光峰面积的线性关系，计算出激光诱导荧光检测金黄色葡萄球菌的检测下限为3CFU/mL。该方法有灵敏度高、操作简单和检测限低，但是存在的问题是荧光分子材料容易脱落、信号不稳定，在复杂基质中易出现失活或荧光猝灭。

申请号为201610031644.6的中国发明专利申请提出了将Fe₃O₄/Ru(bqy)₃²⁺纳米微球富集金黄色葡萄球菌，然后制备试纸条并上样检测的方法。该方法免去了将金黄色葡萄球菌从免疫磁珠中洗脱下来的步骤，提高了捕获效率，减少了工作量和杂菌污染概率。检测方案稳定性好，对金黄色葡萄球菌的检测为10³CFU/mL，另外需额外有机试剂和操作流程参与，并且检测限仍达不到国家检测的标准。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明提供了一种免疫层析试纸条的高灵敏检测方法。

本发明采用如下技术方案：

一种免疫层析试纸条的高灵敏检测方法，其特征在于，将金属纳米粒子与抗体混合连接后，与待测细菌混合进行特异性捕捉，随后滴加到免疫层析试纸条上与其检测线处的抗体再次捕捉，实现待测细菌的稳定沉积，利用等离子体发射光谱检测系统检测免疫层析试纸条检测线处金属纳米粒子的浓度，进而得到待测细菌的浓度。