[发明专利]一株生产微生物油脂的雅致小克银汉霉菌株及其应用

说明书

本发明属于微生物制备柴油技术领域，本发明提供了一株雅致小克银汉霉(Cunninghamella elegans)菌株XY01075 CGMCC No.18838及其在制备生物柴油中的应用。本发明提供的菌株已于2019年11月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明提供的菌株具有生长迅速、易于培养、生物量高、含油率高和能生产大量的油酸。

技术领域

本发明属于微生物制备柴油技术领域。

背景技术

近年来，微生物由于富含油脂而得到广泛关注。通常研究人员将干菌体的含油率在20％-70％的微生物称为油脂微生物(Wynn et al,2001；Ratledge,2004)。按照该标准，真菌界(Fungi)毛霉门(Mucoromycota)毛霉目(Mucorales)小克银汉霉属(Cunninghamella)的大多数物种都能称之为油脂微生物。该类群生物量较大，能够产生高百分比含量的不饱和脂肪酸，但含油率并不突出。比如，Cunninghamella echinulata的含油率范围在30％-48％(Fakas et al,2008；Alakhras et al,2015)；Cunninghamellablakesleeana通过培养条件(C：N比、培养温度和pH等)的优化，干菌体的含油率也只有41％(Sukrutha et al,2014)。如何实现高含油量的菌株成为目前的技术难点。

发明内容

本发明专利公开了一株雅致小克银汉霉(Cunninghamella elegans)菌株XY01075CGMCC No.18838及其在制备生物柴油中的应用。

本发明提供的菌株已于2019年11月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该中心地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，该中心简称为CGMCC，该菌株保藏中心登记入册编号为CGMCC No.18838。

本发明提供的菌株具有生长迅速、易于培养、生物量高、含油率高和能生产大量的油酸。

附图说明

图1是Cunninghamella elegans XY01075的孢囊梗，孢囊孢子显微图。

图2是菌株Cunninghamella elegans XY01075脂肪酸成分气相色谱图。

具体实施方式

实施例1

1.菌种的采集和培养

菌株XY01075分离自土壤样品，采集地点为江苏省镇江市，分离培养基是PDA(马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂粉20g/L)，培养温度为25℃。

菌株进行活化之后，无菌水洗脱孢子，按照5％的接种量接种于培养基中，然后在摇床中140rpm，25℃培养5天。培养完成后，真空抽滤发酵液得到鲜菌体，取出100mg鲜菌体采用气相色谱的方法对脂肪酸成分进行鉴定，其余进行烘干处理得到干菌体提取微生物油脂。

2.菌株鉴定：

(1)分子生物学鉴定

分子生物学使用ITS rDNA序列，设计特异性引物如下：

引物1：5'-GGC TTA ATT TGA CTC AAC ACG G-3'；

引物2：5'-GCT ATC CTG AGG GAA ACT TCG-3'。

ITS rDNA分子条形码序列如序列表1所示。

(2)菌株形态：