[发明专利]一种克氏原螯虾抗脂多糖因子gALF1基因、其编码的gALF1蛋白及其应用

说明书

本发明首次发现了一种克氏原螯虾抗脂多糖因子gALF1基因，所述gALF1基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。本发明利用该基因编码制备了一种gALF1蛋白，所述gALF1蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明还提供了上述基因和蛋白在WSSV病毒感染的免疫和治疗领域的应用。本发明具有有效的抗病毒作用，对WSSV病毒有极强的抑制和杀灭效果，能够有效解决WSSV病毒感染的免疫和治疗问题。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种克氏原螯虾抗脂多糖因子gALF1基因、其编码的gALF1蛋白及其应用。

背景技术

克氏原螯虾又称红螯虾或淡水小龙虾，形似虾而甲壳坚硬；成体长约5.6～11.9厘米。克氏原螯虾是淡水经济虾类，因肉味鲜美广受人们欢迎。因其杂食性、生长速度快、适应能力强而在当地生态环境中形成绝对的竞争优势。其摄食范围包括水草、藻类、水生昆虫、动物尸体等。近年来，克氏原螯虾在我国已经成为重要经济养殖品种，产量巨大。

对虾白斑综合症是由白斑综合症杆状病毒复合体引发的一种综合性病症。白斑综合症杆状病毒复合体主要对虾体的造血组织、结缔组织、前后肠的上皮、血细胞、鳃等系统进行感染破坏。此类病毒复合体的毒力较强，从出现症状到死亡只有3～5天的时间，甚至更短。此病的感染率较高，7天左右可使池中70℅以上的虾得病，甚至死亡。上述疾病对于虾类的养殖而言十分致命，一旦养殖的虾患病，则会造成大面积死亡，而目前对上述疾病没有较好的治疗手段，因此养殖户养殖的虾一旦发病，会造成巨大的经济损失。

抗脂多糖因子作为虾类体液免疫体系中的一种重要抗菌肽，与虾类抵抗病菌或病毒感染的过程密切相关。克氏原螯虾作为一种虾类动物，其体内也存在抗脂多糖因子，用于机体免疫。而克氏原螯虾对环境的适应能力较强，对各种流行性的疾病均有一定的抵抗能力，特别是对虾白斑综合症，克氏原螯虾有较强免疫能力。鉴于此，如果能够对克氏原螯虾的免疫机理进行研究，将能解决对虾白斑综合症的免疫和治疗的问题。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的技术问题，提供一种克氏原螯虾抗脂多糖因子gALF1基因、其编码的gALF1蛋白及其应用，具有有效的抗病毒作用，对白斑综合症杆状病毒有极强的抑制和杀灭效果，能够有效解决对虾白斑综合症的免疫和治疗问题。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种克氏原螯虾抗脂多糖因子gALF1基因，所述gALF1基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

本发明还提供了上述克氏原螯抗脂多糖因子gALF1基因在WSSV病毒感染的免疫和治疗领域的应用。

本发明还提供了上述克氏原螯虾抗脂多糖因子gALF1基因编码的gALF1蛋白，所述gALF1蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

本发明还提供了上述的gALF1蛋白在WSSV病毒感染的免疫和治疗领域的应用。

本发明还提供了上述的gALF1蛋白构建的表达载体，所述表达载体为pGEX-4T-1-gALF1。

本发明还提供了上述的pGEX-4T-1-gALF1表达载体的构建方法，包括以下步骤：

①RNA提取及反转录：

选取克氏原螯虾，抽血解剖取组织样：血淋巴、心、肝、鳃、胃、肠，采用TRIzol法取总RNA，Nano-Drop 300检测RNA纯度及浓度，经琼脂糖凝胶电泳检测通过Bio-Rad凝胶成像仪分析总RNA质量，反转录合成cDNA；

②ALF1全长编码区基因扩增：

设计用于序列扩增的专一性引物，以反转录得到的cDNA为模板作PCR扩增，扩增产物用1.0％琼脂糖凝胶电泳检测后，胶回收试剂盒回收PCR产物；

③pGEX-4T-1-gALF1表达载体的构建：