[发明专利]一种羊膜间充质干细胞的制备方法在审
| 申请号： | 201911184993.1 | 申请日： | 2019-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN110713975A | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 朱灏 | 申请（专利权）人： | 华夏源(上海)细胞基因工程股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/073 |
| 代理公司： | 42261 武汉尚齐知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 韩广 |
| 地址： | 201100 上海市闵行*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 间充质干细胞 制备 组织块 培养皿 培养液 酶消化法 手术剪刀 羊膜组织 干细胞 烤干 羊膜 足量 清洗 细胞 消化 成功 | ||
1.一种羊膜间充质干细胞的制备方法，其特征在于，采用组织块贴壁，包括如下步骤：
(1)组织块贴壁：刮去羊膜表面粘液和血迹，将羊膜清洗干净；用手术剪刀将羊膜剪碎为多个组织块；将组织块清洗离心，去上清；吸取组织沉淀均匀涂抹在培养皿中，将培养皿置于35-40度培养箱中烤干；
(2)组织培养：烤干后，在培养皿中加入4-6ml培养液，于35-40度培养箱中静置培养；培养第三天补加4-6ml培养液，第7--8天换液；
(3)收货细胞：第12--14天，镜下观察细胞集落生长情况，用记号笔标记出上皮细胞集落；轻轻剔除组织块和上皮细胞集落，加入消化液消化，获得羊膜间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述羊膜间充质干细胞的制备方法，其特征在于，用于羊膜清洗的清洗液为含1％双抗的PBS或者生理盐水。
3.根据权利要求1所述羊膜间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述组织块大小为0.5--1.5mm2之间。
4.根据权利要求1所述羊膜间充质干细胞的制备方法，其特征在于，离心操作的条件为为600g，5分钟。
5.根据权利要求1所述羊膜间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述烤干的时间为2--3小时。
6.根据权利要求1所述羊膜间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述培养液为含有20％胎牛血清的a-MEM或D-MEM培养液。
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