[发明专利]一种人类BRAF基因V600E突变的检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种人类BRAF基因V600E突变的检测试剂盒，包括用于检测BRAF基因V600E突变的引物和探针、抑制剂、内控引物及探针、外控引物及探针，其特征在于：检测引物为SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2，检测探针为SEQ ID NO.3；抑制剂为SEQ ID NO.4；内控引物为SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6，内控荧光探针为SEQ ID NO.7；外控引物为SEQ ID NO.8和SEQ IDNO.9，外控荧光探针为SEQ ID NO.10。

2.如权利要求1所述的人类BRAF基因V600E突变的检测试剂盒，包括PCR反应液，阳性质控和阴性质控。

3.如权利要求1或2所述的人类BRAF基因V600E突变的检测试剂盒，PCR反应液包含了热启动taq酶、缓冲液、镁离子、dNTP。

4.如权利要求1、2或3所述的人类BRAF基因V600E突变的检测试剂盒，阳性质控序列为SEQ ID NO.11，阴性质控为水。

5.采用权利要求1-4任一所述的人类BRAF基因V600E突变的检测试剂盒的检测方法，包括实时荧光定量PCR和突变扩增PCR系统(Arms-PCR)联合的PCR扩增。

6.采用权利要求5所述的人类BRAF基因V600E突变的检测试剂盒的检测方法，所述PCR扩增条件为：

预变性的条件为：95℃，2分钟；

PCR扩增第一阶段由5个扩增循环构成，其条件为：变性：95℃，15秒；退火：60℃，20秒；延伸：72℃，20秒；

PCR扩增第二阶段由40个扩增循环构成，其条件为：变性：95℃，15秒；退火：60℃，20秒，设置荧光信号采集；延伸：72℃，20秒。

7.采用权利要求1所述的人类BRAF基因V600E突变的检测试剂盒的检测方法，包括判读步骤，所述判读是在PCR反应体系和循环程序条件下，观察BRAF基因V600E突变的荧光检测信号是否形成对数扩增“S”型曲线；如果形成对数扩增“S”型曲线，该待检测样本含有V600E突变。