[发明专利]磷酸果糖氨基转移酶编码基因及酶的制备与应用

权利要求书

1.一种磷酸果糖氨基转移酶OsGFAT的编码基因，其核苷酸序列具有如下特征中的一种或二种以上：

1)具有序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

2)编码SEQ ID NO.2氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

3)对序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列进行一个或两个以上核苷酸取代、缺失或添加而得到的同源性在76％以上的编码具有磷酸果糖氨基转移酶活性的核苷酸序列。

2.一种权利要求1所述的磷酸果糖氨基转移酶OsGFAT的编码基因编码的磷酸果糖氨基转移酶，其特征在于：其氨基酸序列具有如下特征中的一种或二种：

1)序列表中SEQ ID NO.2从氨基端开始的第1-680位氨基酸残基序列；

2)对序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列进行一个或两个以上氨基酸取代、缺失或添加而形成的同源性在76％以上的编码具有磷酸果糖氨基转移酶活性的氨基酸序列。

3.一种权利要求2所述的磷酸果糖氨基转移酶，其特征在于：该酶对于果糖-6-磷酸(Fru-6-P)有异构酶活性和合成酶活性；异构酶活性是指在底物中不含有L-谷氨酰胺时，将Fru-6-P通过异构变为Glc-6-P，合成酶活性是指在底物中存在L-谷氨酰胺时，该酶将Fru-6-P与从L-谷氨酰胺脱下来的氨基合成为GlcN-6-P)。

4.一种权利要求2或3所述的磷酸果糖氨基转移酶的制备方法，其特征在于：是将权利要求1所述的磷酸果糖氨基转移酶OsGFAT的编码基因克隆入重组表达载体，导入宿主细胞，获得重组表达的磷酸果糖氨基转移酶；所述的重组表达磷酸果糖氨基转移酶的表达载体，是指大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体、链霉菌表达载体、噬菌体载体、丝状真菌表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体或哺乳动物细胞表达载体中的一种或二种以上。

5.按照权利要求4所述方法，其特征在于：用于重组表达磷酸果糖氨基转移酶的重组菌或转基因细胞系，是指大肠杆菌宿主细胞Escherichia coli BL21、Escherichia coliJM109、Escherichia coli DH5α，酵母菌宿主细胞Saccharomyces cerevisiae、Pichiapastoris、Kluyveromyces lactis，枯草杆菌宿主细胞Bacillus subtilis R25、Bacillussubtilis 9920，乳酸菌宿主细胞Lactic acid bacteria COCC101，放线菌宿主细胞Streptomycesspp，丝状真菌宿主细胞Trichoderma viride、Trichoderma reesei、Aspergillus niger、Aspergillus nidulans，昆虫细胞Bombyx mori、Antharaeaeucalypti，哺乳动物细胞中国仓鼠卵巢细胞CHO、幼小仓鼠肾脏细胞BHK、中国仓鼠肺细胞CHL中的一种或二种以上。

6.按照权利要求4或5所述方法，其特征在于：所述磷酸果糖氨基转移酶OsGFAT对果糖-6-磷酸温度在(35-45℃)和PH范围(7-9)活性最高，且

针对其合成酶活性与异构酶活性的表达，在温度与PH的选择性上并没有表现出明显的差别。

7.一种权利要求2或3所述的磷酸果糖氨基转移酶在葡萄糖-6-磷酸与葡萄糖胺-6-磷酸生产中的应用，其特征在于：包括以下应用中的一或二种以上：

1)在实现果糖-6-磷酸向葡萄糖-6-磷酸转变中的应用；

2)在实现果糖-6-磷酸向葡萄糖氨-6-磷酸转变中的应用。