[发明专利]一种提高液体培养紫锥菊不定根中菊苣酸积累的培养方法

说明书

本发明涉及一种提高紫锥菊不定根中菊苣酸积累的培养方法，属于生物技术领域。主要技术方案如下：一种提高紫锥菊不定根中菊苣酸积累的培养方法，包括如下步骤：紫锥菊不定根进行液体培养，在培养0‑600小时过程中加入无菌阿斯巴甜溶液，所述阿斯巴甜溶液的终浓度为20‑200mg/L。所述的阿斯巴甜溶液是以去离子水溶解，调节溶液pH至3.5‑4.5，灭菌，制备而成。本发明的方法具有操作简单，20‑200mg/L浓度的阿斯巴甜能显著提高紫锥菊不定根中菊苣酸的含量，生产周期短，生产成本低，便于菊苣酸的工业化大规模生产应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高液体培养紫锥菊不定根中菊苣酸积累的培养方法。

背景技术

紫锥菊Echinacea spp为菊科紫锥菊属多年生草本植物，原产北美。紫锥菊目前作为药物开发的主要有3个品种，紫松果菊Echinacea purpurea，狭叶紫锥菊Echinaceaangustifolia和白色紫锥菊Echinacea pallida。紫锥菊是应用广泛的药用植物，是国际上公认的免疫调节剂，对增强机体免疫力效果显著。紫锥菊不定根培养产生次代产物成为几年来重点研究的内容，人工悬浮培养的不定根生长迅速，培养周期短，活性成分稳定，因此将不定根液体悬浮培养技术应用于天然产物生产加工，能够在短期内大量获得天然产物原材料，并从中提取得到足量的次级代谢产物，以满足市场需求，从而有效解决野生天然产物资源不足、质量降低等日益凸显的现实问题。

菊苣酸是一种羟基肉桂酸，是紫锥菊中含量最丰富的活性成分。作为紫锥菊最主要的活性成分，菊苣酸主要有以下几种用途：菊苣酸具有抗氧化、增强免疫功能和抗炎作用，并能抑制透明质酸酶，保护胶原蛋白免受可导致其降解的自由基的影响，还具有抑制HIV-1整合酶的作用。菊苣酸用途繁多，但从紫锥菊或其不定根中提取率较低，难于满足市场需求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的紫锥菊不定根组培方法中菊苣酸含量较低的不足，提供一种提高液体培养紫锥菊不定根中菊苣酸积累的培养方法。

本发明的技术方案如下：一种提高紫锥菊不定根中菊苣酸积累的培养方法，包括如下步骤：紫锥菊不定根进行液体培养，在培养0-600小时过程中加入无菌阿斯巴甜溶液，所述阿斯巴甜溶液的终浓度为20-200mg/L。

进一步的，所述的阿斯巴甜溶液是以去离子水溶解，调节溶液pH至3.5-4.5，灭菌，制备而成。

进一步的，所述的液体培养在生物反应器或三角瓶中培养。

进一步的，所述的阿斯巴甜溶液的终浓度为150mg/L。

进一步的，所述的灭菌是用蒸汽灭菌或过滤灭菌。

进一步的，所述的蒸汽灭菌为121-123℃下灭菌20-40min。

进一步的，所述的过滤灭菌为通过0.22μm无菌滤膜过滤除菌。

进一步的，所述的紫锥菊品种为狭叶紫锥菊，白色紫锥菊或紫松果菊。

进一步的，培养480-600小时后，在无菌环境下取出、剪碎后，接入生物反应器或三角瓶中培养，培养720-960小时收获。

本发明的有益效果为：本发明的方法具有操作简单，20-200mg/L浓度的阿斯巴甜能显著提高紫锥菊不定根中菊苣酸的含量，生产周期短，生产成本低，便于菊苣酸的工业化大规模生产应用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明和解释，若无特殊说明，本发明所用原料及设备均为本领域的常规技术。

1、培养基制备、培养及采收方法如下：