[发明专利]一种利用简易包埋模具制备大型海藻冰冻切片样品的方法

说明书

本发明属于海洋生物领域，具体地说涉及一种包埋模具及利用其批量制备大型海藻(草)冰冻切片样品的简易方法。以大型海藻腊叶标本或新鲜藻体为样本材料，通过制备切片样品、制作包埋模具、包埋样品、批量制备、上机切片、染色、显微观察、封片保存步骤达到批量制备冰冻切片样品的目的。本发明取材容易，操作简单，方法有效，极大地提高了大型海藻(草)冰冻切片制备效率。

技术领域

本发明属于海洋生物领域，具体地说涉及一种包埋模具及利用其批量制备大型海藻(草)冰冻切片样品的简易方法。

背景技术

描述大型海藻(草)内部结构特征是经典形态分类学研究的基础。以往的藻类分类学研究通常是通过徒手切片，进而在显微镜下手绘藻体结构黑白色线图。描述我国藻类多样性的学术专著《中国海藻志》其插图也多为手绘线图。然而，我国海藻分类学研究人员严重不足，更是缺乏能够徒手切片且手绘藻体结构线图的科研人员，十分不利于藻类分类学科的发展。

冰冻切片技术操作简单、快速，已广泛应用于医学病理诊断、动物和高等植物组织研究。冰冻切片结合现代多功能显微镜系统拍摄的样品照片也更加清晰美观。然而该技术在海藻学研究中的便捷使用方法仍未见报道。因研究需要，越来越多的藻类研究者期望获得高质量藻类结构图片，但苦于找不到一套快速且实用的切片方法。例如，藻类生理学研究者希望通过切片获得胁迫条件下细胞结构的变化；藻类生态学者希望获得绿潮原因物种内部细胞形态结构；水产养殖学者则希望通过切片获得有害藻类如何侵染养殖藻类内部结构等等。由此可见，切片技术已不仅仅适用于藻类分类学研究，在藻类生理学、生态学和水产养殖等学科中同样也有需求，具有较为广阔的发展空间。因此，将冰冻切片技术应用于藻类学研究具有重要的实践意义。

并且现阶段有些学生做海藻冰冻切片时，选用传统的锡箔纸套在圆柱形物体上定型，进而包埋，这种自治模具质量差，包埋样品易歪斜，且比较费时；更有甚者直接在切片机冷冻托上滴加OCT包埋剂，等其冰冻成固体后再加藻类样品，接着再滴加包埋剂，再等其冻为固体，这种处理往往造成样品歪斜，极其费时费力，很容易导致切片失败。

因此，寻找一套便捷的藻类冰冻切片技术尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种包埋模具及利用其批量制备大型海藻(草)冰冻切片样品的简易方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

本发明批量制备大型海藻(草)冰冻切片样品的简易方法，以大型海藻(草)腊叶标本或新鲜藻体为样本材料，通过制备切片样品、制作包埋模具、包埋样品、批量制备、上机切片、染色、显微观察、封片保存步骤达到快速制备大量冰冻切片样品的目的。

一种包埋模具，包括成模管和出模管，成模管上端开口，下端设有可打开的端盖，出模管上端呈锥状。

所述包埋模具使用时成模管下端端盖扣合形成底部，从成模管上端开口滴入包埋剂，并将样品垂直放入其中央，待凝固成模后，打开端盖，出模管锥端从成模管下端口插入将胶模顶出。

一种批量制备大型海藻(草)冰冻切片样品的简易方法：

以大型海藻腊叶标本或新鲜藻体为样本材料，制备切片样品，而后速冻定型；

将包埋计由模具的成模管上端开口处滴入，滴满后将定型后样品垂直放入其中央，而后将其放在液氮盒中速冻直至包埋剂冷冻为白色固体，取出置于室温条件下回温软化，打开端盖，出模管锥端从成模管下端口插入将胶模顶出，再放在液氮盒中二次速冻，即获得切片样品。

所述大型海藻(草)腊叶标本或新鲜藻体；其中，大型海藻(草)为大型红藻、绿藻、褐藻、大型蓝藻或海草。

具体步骤如下：