[发明专利]一种H13N8重组流感病毒及应用在审
申请号: | 201911195864.2 | 申请日: | 2019-11-29 |
公开(公告)号: | CN110760486A | 公开(公告)日: | 2020-02-07 |
发明(设计)人: | 于志君;朱彤;吴家强;陈为京;高月花 | 申请(专利权)人: | 山东省农业科学院家禽研究所 |
主分类号: | C12N7/01 | 分类号: | C12N7/01;C12N15/85;G01N33/68;A61K39/145;A61P31/16 |
代理公司: | 37221 济南圣达知识产权代理有限公司 | 代理人: | 张晓鹏 |
地址: | 250023 *** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 重组流感病毒 亚型流感病毒 感染性克隆质粒 细胞悬液接种 血凝抑制效价 感染性克隆 鸡胚尿囊液 表达载体 基因合成 抗原基因 流感疫苗 灭活疫苗 内部基因 皮下注射 同源重组 共转染 鸡血清 免疫组 构建 颈部 血凝 转染 合成 细胞 基因 收获 应用 | ||
1.一种H13N8重组流感病毒,其特征在于,所述重组流感病毒以鸡胚适应株PR8病毒内部基因为骨架,以H13N8亚型流感病毒的HA和NA基因为抗原;所述PR8病毒内部基因为PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因。
2.如权利要求1所述H13N8重组流感病毒,其特征在于,所述PB2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;
或所述PB1基因序列如SEQ ID NO:2所示;
或所述PA基因序列如SEQ ID NO:3所示;
或所述NP基因序列如SEQ ID NO:4所示;
或所述M基因序列如SEQ ID NO:5所示;
或所述NS基因序列如SEQ ID NO:6所示;
或所述HA基因序列如SEQ ID NO:7所示;
或所述NA基因序列如SEQ ID NO8所示。
3.一种H13N8重组流感病毒的制备方法,其特征在于,将PR8病毒的PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因与H13N8的HA和NA基因共同导入宿主细胞中培养获得所述H13N8重组流感病毒。
4.如权利要求3所述H13N8重组流感病毒的制备方法,其特征在于,所述PR8病毒的PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因与H13N8的HA和NA基因是通过含有PB2基因的重组载体、含有PB1基因的重组载体、含有PA基因的重组载体、含有NP基因的重组载体、含有M基因的重组载体、含有NS基因的重组载体、含有HA基因的重组载体、含有NA基因的重组载体共同导入宿主细胞中。
5.如权利要求4所述H13N8重组流感病毒的制备方法,其特征在于,所述重组载体的表达载体为pFluDD,所述载体由pUC18载体(Thermo Fisher Scientific公司)改造而成,具体是将CMV启动子、鼠RNA聚合酶I终止子、人RNA聚合酶I启动子和SV40多聚腺苷酸化信号依次插入到pUC18载体上构建获得。
6.如权利要求3所述H13N8重组流感病毒的制备方法,其特征在于,所述宿主细胞为293T细胞、COS7细胞、MDCK细胞、VERO细胞、HL-8细胞中的一种或多种,优选为293T细胞。
7.权利要求1或2所述H13N8重组流感病毒在制备临床检查和/或评估流感疫苗产品中的应用。
8.如权利要求7所述H13N8重组流感病毒在制备临床检查和/或评估流感疫苗产品中的应用,其特征在于,所述流感疫苗为H13N8病毒疫苗。
9.一种疫苗,其特征在于,所述疫苗为权利要求1或2所述H13N8重组流感病毒的灭活制剂。
10.如权利要求9所述疫苗,其特征在于,所述疫苗中还包括冻干保护剂及稳定剂。
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