[发明专利]具有高同源重组效率的重组解脂耶氏酵母菌及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201911196523.7 | 申请日： | 2019-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN110846239B | 公开（公告）日： | 2022-08-23 |
| 发明（设计）人： | 纪晓俊;丁颖;王凯峰;马一榕;王维鉴 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/31;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京汇盛专利商标事务所(普通合伙) 32238 | 代理人： | 袁静 |
| 地址： | 211816 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 具有 同源 重组 效率 解脂耶氏 酵母菌 及其 构建 方法 应用 | ||
1.具有高同源重组效率的重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于，所述重组解脂耶氏酵母菌是在解脂耶氏酵母菌或敲除了ku70基因的解脂耶氏酵母菌基因组中插入了来源于酿酒酵母Rad52上位基因簇的scRad52基因表达盒后得到的，所述表达盒中酿酒酵母Rad52上位基因簇的scRad52基因是经过密码子优化后所得，其基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述scRad52基因表达盒插入位点为解脂耶氏酵母菌或敲除了ku70基因的解脂耶氏酵母菌基因组中A08位点。
2.根据权利要求1所述重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于所述scRad52基因表达盒的启动子为解脂耶氏酵母菌的PylRad52启动子，终止子为解脂耶氏酵母菌的TylRad52终止子。
3.根据权利要求2所述重组解脂耶氏酵母菌，其特征在于所述重组解脂耶氏酵母菌还表达1个或多个标记基因；所述标记基因为3(β)-异丙基苹果酸脱氢酶编码基因表达盒或乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶基因表达盒。
4.权利要求3所述重组解脂耶氏酵母菌的构建方法，包括将所述来源于酿酒酵母Rad52上位基因簇的scRad52基因表达盒通过线性质粒形式导入解脂耶氏酵母或敲除了ku70基因的解脂耶氏酵母中，然后整合在基因组上的步骤。
5.根据权利要求4所述重组解脂耶氏酵母菌的构建方法，其特征在于所述重组解脂耶氏酵母菌基因组中还插入了1个或多个标记基因；所述标记基因为3(β)-异丙基苹果酸脱氢酶基因表达盒或乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶基因表达盒。
6.权利要求1-3之一所述重组解脂耶氏酵母菌在介导不同长度同源臂的同源重组进行基因组DNA遗传修饰中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述同源臂的长度为100-1000bp。
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