[发明专利]检测鳗鲡疱疹病毒的引物对及试剂盒

说明书

本发明提供了检测鳗鲡疱疹病毒的引物对及试剂盒，属于病毒检测技术领域，所述引物对包括引物HAVSYBR_F和引物HAVSYBR_R；所述引物HAVSYBR_F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述引物HAVSYBR_R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。采用SYBR Green qPCR方法，利用本发明所述引物对和试剂盒对鳗鲡疱疹病毒进行检测，无需电泳观察结果，也无需添加荧光探针，添加荧光染料即可；本发明所述试剂盒检测方法更快捷简便，成本更低。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及检测鳗鲡疱疹病毒的引物对及试剂盒。

背景技术

鳗鲡疱疹病毒(herpesvirus anguillae，HVA)是一个普遍存在，具有高度传染性和高致病性的病毒性病原，能够导致鳗鲡“脱粘败血病”。自20世纪80年代以来，野生鳗鲡数量的减少或与之有关。HVA给多国鳗鲡养殖业造成巨大经济损失，目前该病毒已经在全球多个国家发现。随着鳗苗等活鳗的引进，我国主要鳗鲡养殖区普遍发生鳗鲡疱疹病毒感染。以我国“鳗鲡之都”福州为例，主要养殖场发病率约80％，个别养殖场发病率达100％，死亡率约90％，给养殖生产造成严重的危害。

对于鳗鲡疱疹病毒的检测，国外已研究建立了分子杂交检测的方法。但是分子杂交检测方法灵敏度较低，检测程序复杂。无临床症状的鳗鲡依然会携带HVA，具有高灵敏度的检测方法才可以检测鳗鲡携带的HVA。分子杂交的方法不利于携带HVA的鳗鲡的检测，也不满足快速检测通关要求。Rijsewijk等(Rijsewijk,Frans1.Development of apolymerase chain reaction for the detection of Anguillid herpesvirus DNA ineels based on the herpesvirus DNA polymerase gene[J].Journal of VirologicalMethods,2005,1-2:87-94.)建立的PCR检测方法，以HVA的DNA聚合酶基因为序列，分别通过引物对HVApolF/HVApolR，和HVAF/HVAR扩增产生394bp及620bp的目的条带。上述方法存在下述问题：(1)由于不同的普通PCR检测方法因其引物的特性不同，以及反应条件等因素的影响，灵敏度和特异性具有较大差距，上述研究报道的两种PCR检测方法是否满足口岸检疫部门所采用的检测方法应具备的准确性、灵敏性等要求尚待国内权威机构及专家的验证；(2)普通PCR方法检测程序依然较复杂，易于交叉污染，检测通量较低，不利于高通量的检测。2016年，Beurden等报道了利用TaqMan探针检测HVA的的real-time PCR方法(Beurden,Voorbergen-Laarman,Roozenburg,Development and validation of a real-time PCRassay for the detection of anguillid herpesvirus 1[J].Journal of FishDiseases.2016,39,95-104.)，进一步简化了检测程序，避免了交叉污染，但是所述方法成本高，不利于规模化推广。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供检测鳗鲡疱疹病毒的引物对及试剂盒；采用SYBR Green qPCR方法，利用所述引物对和试剂盒对鳗鲡疱疹病毒进行检测，比普通PCR方法更快捷简便，比荧光探针PCR成本更低。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了检测鳗鲡疱疹病毒的引物对，包括引物HAVSYBR_F和引物HAVSYBR_R；所述引物HAVSYBR_F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述引物HAVSYBR_R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明提供了一种检测鳗鲡疱疹病毒的试剂盒，包括所述的引物对。

优选的，所述试剂盒中的引物HAVSYBR_F和引物HAVSYBR_R的使用浓度独立为0.3～0.5μmol/L。