[发明专利]抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒

说明书

本发明涉及医学检测领域，特别涉及抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒。本发明提供的抽提缓冲液包括柠檬酸盐或磷酸盐、无水乙酸钠和水。本发明通过外加电解质，增加了磷脂间电荷的斥力，使PT试剂不容易形成沉淀，更加稳定，测试时的重复性更好。

技术领域

本发明涉及医学检测领域，特别涉及抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒。

背景技术

临床上，在手术前，为了了解患者的止血功能有无缺陷，以事前有所准备，防止术中大出血而措手不及，需要检测患者的凝血功能，而凝血酶原时间(PT)是检测凝血功能之一。PT是检测外源性凝血因子缺乏的主要途径，是证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原和凝血因子V、VII、X的缺陷或者抑制物的存在，同时用于检测口服抗凝剂的用量，是监控口服抗凝剂的首选指标。

PT试剂主要成份为组织凝血活酶(即组织因子和磷脂的混合物)，有些研究提到处理新鲜兔脑得到兔脑粉，在生理盐水中，37℃热激活，再离心得到上清液，冻干得到兔脑组织因子冻干制剂，但该专利中并未提到怎样提高兔脑组织因子冻干制剂的悬浮性。其他的学者提到了用兔脑粉为原材料PT测定体外诊断试剂盒的制备，但是并未提到怎么样提高PT试剂的悬浮性，而悬浮性直接影响到试剂的重复性。

兔脑粉来源的PT试剂是通过浸润把兔脑粉含有的组织因子和磷脂这两种促进凝血的物质以溶液的形式存在，也是这两种物质构成了PT试剂的主要原材料。实际生产过程中兔脑粉的浸出物不止组织因子和磷脂两种物质，还含有其他一些蛋白质等非必须成分，这些非必须成分的存在使得兔脑粉浸出液的溶质浓度过高，另一方面使兔脑浸出液里含有大量的磷脂，这些磷脂远远超出了使PT试剂凝固所需要的最佳量。过高的溶质浓度和大量的磷脂存在使得这种PT试剂稳定性差，即容易形成沉淀。

因此，提供一种稳定性好的PT试剂具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒。本发明通过外加电解质，增加了磷脂间电荷的斥力，使PT试剂不容易形成沉淀，更加稳定，测试时的重复性更好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了兔脑粉的抽提缓冲液，以质量百分含量计，包括如下组分：

在本发明的一些具体实施方案中，以质量百分含量计，包括如下组分：

在本发明的一些具体实施方案中，所述柠檬酸盐为柠檬酸三钠；所述磷酸盐包括磷酸钠，磷酸钾，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或两者以上的混合物。

在本发明的一些具体实施方案中，所述pH值采用乙酸调节。

抽提出的兔脑抽提液由于磷脂的关系，属于表面带负电荷的胶体，胶体的稳定是有条件的，一旦稳定条件被破坏，溶胶中的粒子就会聚集，长大，最后从介质中聚沉，影响胶体聚沉的因素包括加热、电解质等。由于兔脑浸出液带的是负电荷，所以只能加入低浓度高价阴离子，使负电荷间相互排斥，保持胶体粒子的稳定性，而不能只用水或者生理盐水，或者价数高的阳离子。所以加入柠檬酸三钠，由于柠檬酸三钠碱性很强，则加入酸性的无水乙酸钠降低pH值，同时用乙酸来调整pH值。可以替代柠檬酸三钠的高价阴离子化合物可以是磷酸化合物，如磷酸钠，磷酸钾，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾等。

在上述研究的基础上，本发明还提供了所述的抽提缓冲液在制备兔脑抽提液中的应用。

本发明还提供了所述的抽提缓冲液在制备PT检测试剂或PT检测试剂盒中的应用。