[发明专利]一种高效的sgRNA及其在基因编辑中的应用

权利要求书

1.成套试剂，其包括sgRNA、Cas9核酸酶或与所述Cas9核酸酶相关的生物材料、胞嘧啶脱氨酶或与所述胞嘧啶脱氨酶相关的生物材料和UGI蛋白质或与所述UGI蛋白质相关的生物材料；

所述sgRNA靶向靶点序列；

所述sgRNA如式I所示：所述靶点序列转录的RNA-改造的sgRNA骨架；

所述改造的sgRNA骨架为在sgRNA骨架第14-15位之间插入RNA片段甲，且在所述sgRNA骨架第18-19位之间插入RNA片段乙后得到的RNA分子；

所述RNA片段甲与所述RNA片段乙反向互补；

所述RNA片段甲与所述RNA片段乙大小均为3nt；

所述sgRNA骨架为序列9所示的RNA分子；

所述Cas9核酸酶为氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；与所述Cas9核酸酶相关的生物材料为编码所述Cas9核酸酶的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物；

所述胞嘧啶脱氨酶为氨基酸序列是序列3所示的蛋白质；与所述胞嘧啶脱氨酶相关的生物材料为编码所述胞嘧啶脱氨酶的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物；

所述UGI蛋白质为氨基酸序列是序列4所示的蛋白质；与所述UGI蛋白质相关的生物材料为编码所述UGI蛋白质的核酸分子或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。

2.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述改造的sgRNA骨架为序列10所示的RNA分子。

3.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述sgRNA为tRNA-sgRNA；

所述tRNA-sgRNA如式Ⅱ所示：tRNA-所述靶点序列转录的RNA-改造的sgRNA骨架；

所述tRNA为将序列1第474-550位中的T替换为U得到的RNA分子。

4.权利要求1-3任一所述的成套试剂在X1）-X4）中任一种中的应用：

X1）植物或植物细胞基因组靶点序列的编辑；

X2）制备植物或植物细胞基因组靶点序列的编辑的产品；

X3）提高植物或植物细胞基因组靶点序列的编辑效率；

X4）制备提高植物或植物细胞基因组靶点序列的编辑效率的产品。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述基因组靶点序列的编辑为将所述靶点序列中的C突变为T。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述植物为单子叶植物或双子叶植物；所述植物细胞为单子叶植物细胞或双子叶植物细胞。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述植物为禾本科植物；所述植物细胞为禾本科植物细胞。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述植物为水稻；所述植物细胞为水稻细胞。

9.Y1）或Y2）所述的方法：

Y1）植物或植物细胞基因组靶点序列的编辑方法或提高植物或植物细胞基因组靶点序列的编辑效率的方法，包括使植物或植物细胞内表达权利要求1-3中任一所述的sgRNA、权利要求1-3中任一所述的Cas9核酸酶、权利要求1-3中任一所述的胞嘧啶脱氨酶和权利要求1-3中任一所述的UGI蛋白质，实现基因组靶点序列的编辑；所述sgRNA靶向所述靶点序列；

Y2）植物突变体的制备方法，包括如下步骤：按照Y1）所述的方法对植物的基因组进行编辑，获得植物突变体。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述基因组靶点序列的编辑为将所述靶点序列中的C突变为T。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述植物为单子叶植物或双子叶植物；所述植物细胞为单子叶植物细胞或双子叶植物细胞。