[发明专利]一种大肠杆菌诱导蛋白表达的发酵方法

说明书

本发明公开了一种大肠杆菌诱导蛋白表达的发酵方法，属于生物技术领域。该发酵方法包括以下步骤：将待发酵的种子液接种于发酵培养液中，并置于0.05~0.1MPa的压力条件下进行恒温发酵培养6~10h后，得到发酵底液；往上述发酵底液中添加诱导剂；所述诱导剂在所述发酵底液中质量浓度为0.1~1.5mmol/L；往上述加有诱导剂的发酵底液中添加补料液，并继续进行恒温发酵培养20~48h，得到发酵产物；所述补料液与所述加有诱导剂的发酵底液的体积比为(0.5~2):1。本发明提供的发酵方法可以在36~40℃的环境下进行诱导蛋白的表达，其无需对发酵底液进行快速降温，也可以达到与降温到25~30℃的蛋白表达量，从而可以大大降低能耗以及节约生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种大肠杆菌诱导蛋白表达的发酵方法。

背景技术

现有大肠杆菌的工业高密发酵中，一般需要把整罐发酵液从大肠杆菌的最适生长降温（36~40℃）到一个相对低的温度（25~30℃）才能诱导蛋白的表达，以此实现高效的蛋白表达。这一降温过程需要在很短的时间内完成，在生产中，吨级以上发酵罐的降温能耗是巨大的，特别是在炎热的夏天。很多企业不得不在夏天停产，就是因为这一降温过程的成本太高。

因此，目前亟需一种可以在最适生长温度（36~40℃）进行诱导蛋白表达的发酵方法，以解决现有存在的发酵成本较高、耗能较大的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大肠杆菌诱导蛋白表达的发酵方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种大肠杆菌诱导蛋白表达的发酵方法，包括以下步骤：

将待发酵的种子液接种于发酵培养液中，并置于0.05~0.1MPa的压力条件下进行恒温发酵培养6~10h后，得到发酵底液；所述种子液的体积为发酵培养液体积的0.5%~2%；所述发酵培养液中的溶氧量为15%~90%；

往上述发酵底液中添加诱导剂；

往上述加有诱导剂的发酵底液中添加补料液，并继续进行恒温发酵培养20~48h，得到发酵产物；所述补料液与所述加有诱导剂的发酵底液的体积比为(0.5~2):1。

优选的，所述恒温发酵培养的温度为36~40℃。

优选的，所述恒温发酵培养的通气量为0.5~6vvm。

优选的，所述的发酵培养液包括以下按照质量浓度或体积浓度计的组分：硫酸铵0.7~1g/L、柠檬酸三钠0.8~1.1g/L、磷酸氢二钾10~15g/L、磷酸二氢钾5~7g/L、酵母粉2~4g/L、柠檬酸铁铵0.05~0.1g/L、微量元素溶液6~10mL/L、聚醚消泡剂0.1~1mL/L。

优选的，所述的微量元素溶液包括以下按照质量浓度计的组分：氯化钙1~3g/L、硫酸锌1~3g/L、硫酸锰0.1~1g/L、硫酸铜0.5~1.5g/L、钼酸铵0.05~0.2g/L、四硼酸钠0.01~0.05g/L。

优选的，所述的诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷、乳糖、L-Arabinose和Tetracycline中的一种。

优选的，所述补料液包括以下按照质量浓度计的组分：葡萄糖400~600g/L、氯化铵10~15g/L、硫酸镁4~6g/L。

与现有技术相比，本发明实施例的有益效果是：

本发明实施例提供的一种大肠杆菌诱导蛋白表达的发酵方法，可以在36~40℃的环境下进行诱导蛋白的表达，其无需对发酵底液进行快速降温，也可以达到与降温到25-30℃的蛋白表达量，从而可以大大降低能耗以及节约生产成本。

附图说明

图1为实施例5得到的发酵产物的电泳图。