[发明专利]脂多糖在建立人牙龈成纤维细胞应激衰老模型中的应用

说明书

本发明提供一种脂多糖在建立人牙龈成纤维细胞应激衰老模型中的应用、方法及人牙龈成纤维细胞应激衰老模型。本发明提供的人牙龈成纤维细胞应激衰老模型可以更全面的反映非增龄性的应激口腔衰老，为口腔抗衰类产品功效性评价提供一个更加客观、科学和准确的评价模式。

技术领域

本发明属于护肤品或化学物质安全性检测技术领域，具体涉及脂多糖在建立人牙龈成纤维细胞应激衰老模型中的应用、方法及人牙龈成纤维细胞应激衰老模型。

背景技术

衰老是自然界一切生命由遗传因素和内外环境相互作用下的生物学过程，这个过程从出生、发育、成长直到死亡，是机体功能退行性下降及紊乱的综合变化。在人们注重皮肤等身体机能的老化时，口腔组织的衰老也受到了更多的关注。口腔组织的结构及其功能衰老的主要表现为龋病、牙菌斑和牙周组织病变导致的牙龈裸露、牙齿敏感和松动。与此同时，具有抗衰功效的口腔类护理产品逐渐进入大众的视野，并且受众越来越年轻化，也是各大口腔类产品公司和研究机构的重要研究领域范畴，他们投入大量的人力物力用于新型口腔抗衰产品的开发，然而目前还没有令人信服的用于检测此类产品抗衰功效的体外口腔衰老模型。人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，hGFs）是健康牙龈组织的主要间质细胞，能够合成分泌胶原、基质并吞噬异物，抵抗外界物理、化学及微生物刺激的能力，在牙龈、牙周组织生理和病理变化研究中起到重要作用，多用于口腔类产品体外功效检测。截止目前，用于检测口腔类产品抗衰功效的衰老模型主要有：复制性衰老模型、氧化性衰老模型。

复制性衰老模型：收集健康的牙龈组织样，采用组织块法体外原代培养健康的人牙龈成纤维细胞，进行连续传代培养构建牙龈衰老模型，其衰老状态可通过累积细胞群体倍增指数（cumulative population doublings，CPD）、CCK-8法检测细胞增殖能力及real-time PCR检测衰老相关基因p16^INK4α、p21^Cipl 的表达情况进行评估。

氧化性衰老模型：采用紫外（UV）辐照、过氧化氢及烟草提取物等刺激物对体外培养的健康人牙龈成纤维细胞进行快速的氧化性刺激，其衰老状态可通过流式细胞仪检测活性氧簇ROS（reactive oxygen species）含量、MTT法检测细胞活力及real-time PCR检测基质金属蛋白酶基因MMP等表达情况进行评估，其中活性氧簇ROS含量是关键指标。

上述两种口腔衰老模型用于评价口腔类产品抗衰功效时各有利弊。复制性衰老模型构建方法简单，无需额外刺激物，只需进行体外连续传代培养，能反映在正常无外界刺激的条件下，个体从年轻到衰老过程中细胞所发生的生物学变化，模拟细胞正常衰老的连续性过程。但是这种模型仅适用于增龄性衰老，目前口腔类疾病的发生人群越来越年轻化，因此这种复制性口腔衰老模型并不适用于通过化学损伤、氧化应激损伤或激活相关信号通路等细胞内外的应激因素引起细胞短时间内出现不依赖于端粒缩短的衰老。氧化性衰老模型属于应激早衰（stress-induced premature senescence，SIPS），可以反映由于化学损伤与氧化应激损伤如烟草、辐射等日常生活中的外界因素导致的口腔衰老。然而，导致非增龄性的口腔衰老的诱因有很多，包括微生物、遗传及环境因素等，氧化性口腔衰老模型仅能反映部分环境因素导致的衰老，适用范围依旧有限。因此，需要一种非增龄性的、适用范围更广的应激性口腔衰老模型，以便通过更为完善的检测体系评价口腔类产品的抗衰功效。

发明内容

本发明的目的在于，针对现有技术存在的问题，提供一种脂多糖在建立人牙龈成纤维细胞应激衰老模型中的应用、方法及人牙龈成纤维细胞应激衰老模型。

为实现本发明的目的，本发明提供以下技术方案：

本发明第一方面提供一种脂多糖在建立人牙龈成纤维细胞应激衰老模型中的应用。

优选地，脂多糖在建立人牙龈成纤维细胞应激衰老模型中的应用过程为：