[发明专利]一种大肠杆菌电化学生物传感器的制备与检测方法

权利要求书

1.一种大肠杆菌电化学生物传感器的制备与检测方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1，将玻碳电极置于壳聚糖溶液中，即将GCE电极置于Chi溶液中，用NaOH溶液调整Chi溶液pH值为5至6，通过循环伏安法将Chi沉积到GCE电极；清洗、干燥得到Chi-GCE电极；

步骤2，将所述Chi-GCE电极浸泡在多巴胺溶液中，即DA溶液中，用三电极系统和循环伏安法电聚合DA，制备多巴胺-壳聚糖-GCE修饰电极，即DA-Chi-GCE修饰电极，并清洗、干燥；

步骤3，将所述DA-Chi-GCE修饰电极浸泡在D-甘露糖溶液中，即D-man溶液中，制备D-甘露糖-多巴胺-壳聚糖-GCE修饰电极，即D-man-DA-Chi-GCE修饰电极，形成D-man-DA-Chi传感器；

步骤4，将所述D-man-DA-Chi-GCE修饰电极置于双电子媒介体溶液中，构成包括电极材料、电极修饰膜、固定化生物活性化合物和双电子媒介体系；并滴入大肠杆菌待检溶液进行检测；

其中，所述电极材料为玻碳；所述电极修饰膜为多巴胺-壳聚糖膜，即DA-Chi膜；所述生物活性化合物为D-甘露糖，即D-man；所述双电子媒介体溶液为Fc-Ru³⁺溶液，其中Fc为二茂铁二甲醇、Ru³⁺为三氯化六铵合钌。

2.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌电化学生物传感器的制备与检测方法，其特征在于，

所述步骤1中壳聚糖，即Chi的制备方法包括：

步骤1.1，用酸性的第一溶剂溶解壳聚糖，用碱性的第二溶剂调节壳聚糖溶液的pH；

步骤1.2，将GCE电极浸泡在Chi溶液中，利用双电极系统，GCE电极为阴极，Pt电极为对电极，利用计时电流法电沉积Chi到GCE电极表面；

步骤1.3，用超纯水清洗Chi修饰的GCE电极，即Chi-GCE，氩气干燥。

3.根据权利要求2所述的一种大肠杆菌电化学生物传感器的制备与检测方法，其特征在于，

所述步骤1的壳聚糖为β-（1-4）-2-氨基-2-脱糖-D葡萄糖，所述壳聚糖在传感器电极上的制备方法为阳离子电沉积。

4.根据权利要求2所述的一种大肠杆菌电化学生物传感器的制备与检测方法，其特征在于，

所述步骤1中壳聚糖电极表面膜的制备方法包括：

所述第一溶剂为稀HCI溶液，所述的第二溶剂为NaOH溶液；

其中稀盐酸溶液的浓度为1mol/L，NaOH溶液的浓度为1mol/L；

壳聚糖在稀盐酸溶液中的质量浓度为1.25%；

再经NaOH溶液调整后的Chi溶液pH为5至6；

其中电沉积所用电压为-0.5至3V，所述电沉积时间为500秒。

5.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌电化学生物传感器的制备与检测方法，其特征在于，

所述步骤2中多巴胺-壳聚糖电极表面膜的制备方法包括以下方法：

步骤2.1，用缓冲盐溶液配制DA溶液；

步骤2.2，将制得的Chi-GCE浸泡在DA溶液中，用三电极系统和循环伏安法电聚合DA，制备DA-Chi-GCE修饰电极；

步骤2.3，用超纯水清洗反应后的电极，氩气干燥；

其中DA-Chi膜包含通过席夫碱反应形成的DA与Chi加成化合物，其中缓冲盐溶液为磷酸缓冲盐溶液，即PBS溶液，席夫碱反应官能团为DA的氨基和Chi的羧基，磷酸缓冲液PBS的浓度为0.08至0.15M/L，DA溶液浓度为5mmol/L；循环伏安法电压-0.2至0.9V。