[发明专利]一种大肠杆菌发酵方法

权利要求书

1.一种大肠杆菌发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

在将大肠杆菌接种到发酵底液后，按照发酵底液体积的0.2% ~ 0.3%加入发酵补料进行预补料，预补料完成后恒温培养进行发酵；

当需要补料时，采取逐渐递增的补料速度向发酵液中加入发酵补料进行补料，同时控制发酵液的残糖浓度逐渐降低；

当发酵液OD 600 达到20 ~ 35时，停止补料，并在溶氧高于100%后，按照8 ~ 40g/L的比例向发酵液中添加诱导培养基，进行诱导；

以每小时加入发酵底液体积的0.9% ~ 1.2%的加料速度继续向发酵液中加入发酵补料至诱导剂消耗完毕；

在诱导剂消耗完毕后，以每小时加入发酵底液体积的1.5% ~ 1.8%的加料速度继续向发酵液中加入发酵补料；

其中发酵底液的配方为：0.88g/L硫酸铵、0.98g/L柠檬酸三钠、12.5g/L磷酸氢二钾、6.25g/L磷酸二氢钾、3.33g/L酵母浸粉以及0.083g/L柠檬酸铁铵，发酵补料的配方为：400~500g/L葡萄糖、12g/L氯化铵以及5g/L硫酸镁。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵方法，其特征在于，所述按照发酵底液体积的0.2% ~ 0.3%加入发酵补料进行预补料的步骤具体为：

按照发酵底液体积的0.25%加入发酵补料进行预补料。

3.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵方法，其特征在于，所述预补料完成后恒温培养进行发酵的步骤中，发酵温度为35-39℃。

4.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵方法，其特征在于，所述采取逐渐递增的补料速度向发酵液中加入发酵补料进行补料的步骤中，补料速度为每小时加入发酵底液体积的0.2%~1.0%。

5.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵方法，其特征在于，所述当发酵液OD 600 达到20~35时，停止补料的步骤具体为：

当发酵液OD 600 达到20 ~ 35且发酵液的残糖浓度不高于0.2%时，停止补料。

6.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵方法，其特征在于，所述按照8 ~ 40g/L的比例向发酵液中添加诱导培养基的过程中，诱导培养基的添加量为15g/L。

7.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵方法，其特征在于，所述诱导培养基为在高温条件下溶解的乳糖浓度为50-400g/L的乳糖诱导剂。

8.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵方法，其特征在于，所述以每小时加入发酵底液体积的0.9% ~ 1.2%的加料速度继续向发酵液中加入发酵补料至诱导剂消耗完毕的步骤具体为：

以每小时加入发酵底液体积的1.05%的加料速度继续向发酵液中加入发酵补料至诱导剂消耗完毕。

9.根据权利要求1所述的大肠杆菌发酵方法，其特征在于，所述在诱导剂消耗完毕后，以每小时加入发酵底液体积的1.5% ~ 1.8%的加料速度继续向发酵液中加入发酵补料的步骤具体为：

在诱导剂消耗完毕后，以每小时加入发酵底液体积的1.65%的加料速度继续向发酵液中加入发酵补料。