[发明专利]一种提高灵芝三萜含量的共培养方法及应用

权利要求书

1.一种提高灵芝三萜含量的共培养方法，其特征在于：该方法采用蛹虫草-灵芝液体共培养发酵太子参，包括以下步骤：

（1）将蛹虫草（Cordyceps militaris）B1528 和灵芝菌（Ganoderma Lucidum）B1.4 进行活化： 取斜面保存的灵芝菌种和蛹虫草菌种，用接种针接在改良PDA 培养基上，写上编号、标记及接种日期，用封口胶密封，倒置培养皿，放20℃人工气候培养箱内培养，待菌丝长满培养皿即可；所述的灵芝菌 B1.4 保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M2019790，所述的蛹虫草 B1528 保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M2019789；灵芝菌 B1.4 和蛹虫草B1528 接种比例为1:1；所述改良PDA培养基的配制：在常规配方上加1%蛋白胨进行配制；配制好后高压灭菌，灭菌条件：121℃，30min；

（2）蛹虫草种子液制备：用接种针向含200mL改良马铃薯液体培养基的500mL三角瓶中接入大小均匀的5-7块/100mL块待用的培养皿蛹虫草菌种，置摇床上，于200r/min，温度25℃±1℃，避光培养5-7d，至培养液澄清、粘稠、含有大量大小均一的菌丝、且三角瓶的瓶壁上出现外圈为白、内圈为淡黄色的菌膜，即可；所述改良液体马铃薯培养基的配制：操作同改良PDA的配制，但是配方中不加入2%琼脂，其余药品均不变；

 （3）灵芝种子液制备：用接种环向含1000mL改良马铃薯液体培养基的3000mL三角瓶中接入大小均匀的5-7 块/100mL块待用的培养皿灵芝菌种，于120r/min摇床上，温度28℃±1℃， 振荡避光培养12h，然后静止避光培养12h，共培养5-7d，直至培养液澄清、含有大量细小星芒状菌球、大小均匀，且三角瓶瓶壁上出现一圈白色菌膜，即可；

 （4）太子参药性培养基的配制：将太子参药材，60℃热风干燥，粉碎，药典七号筛，往培养瓶中加入30%体积的大米，浸泡过夜，然后称取20%体积的太子参粉末于其中，加水适量，使整个培养基含水量达20-30%，混合均匀，写上编号、标记及日期，灭菌条件121℃，90min；

（5）太子参药性基质的接种及发酵培养：将高压灭菌90min 的太子参药性培养基冷却至室温后，将蛹虫草种子液和灵芝种子液按 1:1 比例接入太子参药性基质中进行培养，接入体积/质量比为太子参药性基质的80%-100%，温度25℃，静置避光培养15d，光照培养15d，共30d。