[发明专利]一种提高神经营养因子NT-3碱性蛋白产量的蛋白改造方法

权利要求书

1.一种提高神经营养因子NT-3碱性蛋白产量的蛋白改造方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）神经营养因子NT-3碱性蛋白的原始基因序列如SEQ ID NO. 1所示；

（2）以小鼠肝脏组织或脑组织提取的RNA经反转录制备的cDNA模板，以F1/ R1为引物对，通过点突变扩增技术将原始基因序列中“第22位~第28位”的碱基序列“CGAGGAG”进行同义突变，得到新的基因序列如SEQ ID NO. 2所示；

（3）将步骤（2）所得序列如SEQ ID NO. 2所示的基因片段构建到pET 32a表达载体中，再转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白诱导表达，纯化获得神经营养因子NT-3碱性蛋白。

2. 根据权利要求1所述的提高神经营养因子NT-3碱性蛋白产量的蛋白改造方法，其特征在于，所述引物对F1/R1序列如下：

F1: 5′-CCGGAATTC TATGCAGAACATAAGAGTCACCGCGGCGAG-3′

R1: 5′-CCGCTCGAG TGTTCTTCCAATTTTTCTCGACAAGGC-3′。

3. 根据权利要求1所述的提高神经营养因子NT-3碱性蛋白产量的蛋白改造方法，其特征在于，所述同义突变是指将碱基序列“CGA GGA G”突变成碱基序列“CGC GGC G”。

4. 根据权利要求1所述的提高神经营养因子NT-3碱性蛋白产量的蛋白改造方法，其特征在于，所述载体构建的具体操作过程：以小鼠肝脏组织或脑组织提取的RNA经反转录制备的cDNA为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增得到PCR产物P1，用EcoRI和Xho I分别对PCR产物P1、pET32a质粒进行双酶切，采用T4 DNA连接酶进行连接并转化至大肠杆菌DH5α筛选得到正确的重组质粒pET32a-NT3，然后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白诱导表达。