[发明专利]一种无酶生物传感器用于检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性有效
申请号: | 201911206524.5 | 申请日: | 2019-11-29 |
公开(公告)号: | CN110734961B | 公开(公告)日: | 2021-10-29 |
发明(设计)人: | 陈宪;王玉超 | 申请(专利权)人: | 福州大学 |
主分类号: | C12Q1/6825 | 分类号: | C12Q1/6825;C12Q1/34 |
代理公司: | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人: | 饶文君;蔡学俊 |
地址: | 350108 福建省福州市*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 生物 传感器 用于 检测 嘧啶 dna 糖基化酶 活性 | ||
1.一种检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的生物传感器,其特征在于,包括1链,2链和3链;所述1链,2链和3链均是发夹结构,在目标UDG存在的条件下1链中的“U”碱基被切割成无碱基的空位点,引起1链的DNA结构由发夹结构变为单链结构;单链结构的1链充当引发链来打开2发夹链,3链被2链序列打开并将单链1链替换下去,形成2链和3链的双链结构,从而使2链中用于形成银纳米团簇的序列暴露出来并使3链中的富G序列靠近银纳米团簇模板序列,直到溶液中的2链与3链互相结合,加入AgNO3溶液和NaBH4溶液,激发银纳米团簇发出强烈的荧光,实现检测;
所述1链序列为:CCCTATCAGGCCTATCTCCAACTAAAC/rU/GA/rU/TAG;
所述2链的序列为:CCCTTAATCCCCTATCACGTAACTATCAACATAGGCCTGATAGGG;
所述3链序列为: ATCACGCCTATGTTGATAGTTACGTGATGGGGTGGGGTGGGGTGGG;
2链的银纳米团簇结合序列与AgNO3、NaBH4的摩尔比为1:6:6。
2.根据权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,发夹结构的DNA制备方法如下:用20mM的PBS缓冲液配制1链、2链、3链,然后95℃加热5min,自然冷却至室温形成发夹结构,4℃储存备用。
3.一种如权利要求1所述的生物传感器在非诊断治疗目的检测UDG中的应用,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将UDG酶的标准溶液或待测液和1链、UDG-10×Reaction Buffer混合,37℃恒温反应1h;
(2)高温灭活步骤(1)溶液中的UDG酶,然后冷却至20℃备用;
(3)向步骤(2)的溶液中加入2链、3链,20℃混合进行催化发夹自组装反应2h;
(4)向步骤(3)的溶液中加入AgNO3,避光放在4℃的环境中放置20min,再加入NaBH4溶液,用20mM的PBS缓冲液定容使反应终体积为100μL,4℃避光孵育;
(5)将步骤(4)的溶液进行荧光检测:根据系列浓度UDG标准溶液的荧光强度做标准曲线,计算回归方程,根据待测物的荧光强度,计算得所含UDG的含量。
4. 根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)所述UDG-10×Reaction Buffer含有终浓度20mM pH=8.2 Tris-HCl,10mM的EDTA,100mM的NaCl。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(4)反应时间为1-5h。
6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(5)中,所述荧光检测的激发波长设置为575nm,发射波长为630nm,检测范围为590nm-720nm。
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