[发明专利]一种无酶生物传感器用于检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性

权利要求书

1.一种检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的生物传感器，其特征在于，包括1链，2链和3链；所述1链，2链和3链均是发夹结构，在目标UDG存在的条件下1链中的“U”碱基被切割成无碱基的空位点，引起1链的DNA结构由发夹结构变为单链结构；单链结构的1链充当引发链来打开2发夹链，3链被2链序列打开并将单链1链替换下去，形成2链和3链的双链结构，从而使2链中用于形成银纳米团簇的序列暴露出来并使3链中的富G序列靠近银纳米团簇模板序列，直到溶液中的2链与3链互相结合，加入AgNO₃溶液和NaBH₄溶液，激发银纳米团簇发出强烈的荧光，实现检测；

所述1链序列为：CCCTATCAGGCCTATCTCCAACTAAAC/rU/GA/rU/TAG；

所述2链的序列为：CCCTTAATCCCCTATCACGTAACTATCAACATAGGCCTGATAGGG；

所述3链序列为： ATCACGCCTATGTTGATAGTTACGTGATGGGGTGGGGTGGGGTGGG；

2链的银纳米团簇结合序列与AgNO₃、NaBH4的摩尔比为1：6：6。

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，发夹结构的DNA制备方法如下：用20mM的PBS缓冲液配制1链、2链、3链，然后95℃加热5min,自然冷却至室温形成发夹结构，4℃储存备用。

3.一种如权利要求1所述的生物传感器在非诊断治疗目的检测UDG中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将UDG酶的标准溶液或待测液和1链、UDG-10×Reaction Buffer混合，37℃恒温反应1h；

（2）高温灭活步骤（1）溶液中的UDG酶，然后冷却至20℃备用；

（3）向步骤（2）的溶液中加入2链、3链，20℃混合进行催化发夹自组装反应2h；

（4）向步骤（3）的溶液中加入AgNO₃，避光放在4℃的环境中放置20min，再加入NaBH₄溶液，用20mM的PBS缓冲液定容使反应终体积为100μL，4℃避光孵育；

（5）将步骤（4）的溶液进行荧光检测：根据系列浓度UDG标准溶液的荧光强度做标准曲线，计算回归方程，根据待测物的荧光强度，计算得所含UDG的含量。

4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（1）所述UDG-10×Reaction Buffer含有终浓度20mM pH=8.2 Tris-HCl，10mM的EDTA，100mM的NaCl。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（4）反应时间为1-5h。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（5）中，所述荧光检测的激发波长设置为575nm，发射波长为630nm，检测范围为590nm-720nm。