[发明专利]一种左旋多巴的生物合成方法

权利要求书

1.一种左旋多巴的生物合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌细胞按照细胞湿重1~20 g/L与含有丙酮酸铵1~5 g/L，邻苯二酚1.6-8 g/L的水溶液混合均匀，氨水调节pH 7.5~8.0，16℃温度条件下，抽真空搅拌催化反应3 h，得到反应混合液；

所述表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌细胞的制备方法按如下步骤：

1）将基因序列如SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶基因进行密码子优化后，插入到质粒pJJDuet30上的SacⅡ和BamHⅠ限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于T7启动子的下游并受其调控，得到重组表达载体pJJ-dhtpl；

2）用重组表达载体pJJ-dhtpl转化大肠杆菌，获得大肠杆菌基因工程菌BL21/pJJ-dhtpl；

3）将大肠杆菌基因工程菌BL21/pJJ-dhtpl在发酵罐中进行发酵，诱导重组酪氨酸酚裂解酶的表达；

4）离心，获得表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌细胞；

（2）向步骤（1）得到的反应混合液中加入丙酮酸铵和邻苯二酚，使所述丙酮酸铵的终浓度为1~5 g/L，所述邻苯二酚的终浓度为1.6~8 g/L，继续抽真空搅拌催化反应3 h，重复该步骤8~10次；

（3）反应结束后，收集底部结晶物，洗涤，重结晶，得左旋多巴。