[发明专利]一种新型GDSL家族脂类水解酶EII-3及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种具有水解酶活性的分离的多肽，其与SEQ ID NO:2的多肽所示序列一致。

2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：所述的具有水解酶活性的多肽，其来源于韩国潮滩表层的细菌Altererythrobacter gangjinensis。

3.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：所述多肽包含氨基酸位置为56至59由甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-亮氨酸组成的保守区，58位丝氨酸与207位天冬氨酸和210位组氨酸共同构成丝氨酸水解酶催化三联体。

4.编码权利要求1所述多肽的多核苷酸，其与SEQ ID NO:1的核苷酸所示序列一致。

5.一种核酸构建体，其包含与一种或多种调控序列可操作地连接的如权利要求4所述的多核苷酸，所述调控序列在合适的表达宿主中指导所述多肽的产生。

6.一种重组表达载体，其包含权利要求5的核酸构建体。

7.根据权利要求6所述的重组表达载体，其特征在于：所述的载体为原核表达载体pET系列载体、pQE系列载体；酵母表达载体pPICZ-α-A、pHIL-D2、pPIC9、pHIL-S1；或动物细胞表达载体pSVK3、pMSG。

8.根据权利要求7所述的重组表达载体，其特征在于：所述的载体为大肠杆菌表达载体pSMT3。

9.一种宿主，其由权利要求6-8任一项所述的载体经转化或转染原核生物或真核生物宿主得到。

10.根据权利要求9所述的宿主，其为细菌、酵母或哺乳动物细胞。

11.根据权利要求10所述的宿主，其为E.coli细菌、甲醇酵母或中国仓鼠卵巢细胞。

12.根据权利要求11所述的宿主，其为E.coli细菌。

13.一种制备权利要求1-3任一项所述多肽的方法，其包括：

(a)、在有助于产生多肽的条件下培养权利要求9所述的宿主，其中所述宿主包含SEQID NO:1所示核苷酸；

(b)、回收所述多肽。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于：所述方法步骤(2)中，回收方法包括离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于：所述方法步骤(2)中，通过多种本领域已知的方法纯化，所述方法包括离子交换层析、亲和层析、疏水层析、层析聚焦层析、大小排阻层析或差示溶解度方法。

16.权利要求1所述的多肽或权利要求9所述的能表达多肽的宿主在催化酯类水解中的应用。

17.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述的酯类为C2-C8短碳链脂肪酸酯或C10-C14的长碳链脂肪酸酯。

18.根据权利要求17所述的应用，其特征在于，所述的酯类为具有C2-C8短碳链的对硝基苯酚酯。

19.根据权利要求18所述的应用，其特征在于，所述的酯类为硝基苯酚乙酸酯、对硝基苯酚丁酸酯、对硝基苯酚己酸酯和对硝基苯酚辛酸酯。

20.根据权利要求19所述的应用，其特征在于，所述的酯类为对硝基苯酚己酸酯。