[发明专利]定量检测GNA15基因表达量的引物探针组、试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种定量检测GNA15基因表达量的引物探针组、试剂盒和方法，引物探针组包括包括组分A、组分B，组分A包括上游引物GNA15‑FP、下游引物GNA15‑RP和探针GNA15‑probe，组分B包括上游引物ABL1‑FP、下游引物ABL1‑RP和探针ABL1‑probe。本发明优点在于能够定量检测细胞中的GNA15基因的相对表达量，GNA15的灵敏度和ABL1的灵敏度均高达100拷贝，灵敏度高，结果精准、可靠性高，为血液肿瘤细胞（尤其是急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病）提供了一种新的辅助诊断方法或辅助鉴定方法，具有较大的应用前景。

技术领域

本发明涉及生化检测领域，尤其是涉及一种用于定量检测GNA15基因表达量的引物探针组，还涉及一种包含该引物探针组的试剂盒，还涉及一种定量检测GNA15基因表达量的方法。

背景技术

GNA15是GNA基因家族（包括GNAQ、GNA11、GNA14和GNA15）的一个成员。GNA15表达的蛋白为GNA15蛋白（即Gα15）属于Gα q亚科，在高度特异性细胞类型中表达，如在特定分化阶段的造血干细胞和上皮细胞，能够参与调控细胞的凋亡或增殖，如Gα15通过偶联广泛的GPCR促进细胞的增殖，抑制细胞的凋亡。人类GNA15基因定位于19p13.3，GNA15基因在多种实体肿瘤如胃肠胰神经内分泌肿瘤、肝癌、卵巢癌中可能发挥癌基因作用，在胃肠胰神经内分泌肿瘤中，其可能通过影响ERK、NFκB和Akt信号通路发挥作用。但是，目前尚未出现检测GNA15基因表达量的相关报道，即用GNA15基因表达量辅助鉴定肿瘤细胞仍处于空白阶段。

发明内容

本发明目的在于提供一种定量检测GNA15基因表达量的引物探针组，还涉及一种包含该引物探针组的试剂盒，还涉及一种利用该试剂盒定量检测GNA15基因表达量的方法。

为实现上述目的，本发明采取下述技术方案：

本发明所述的定量检测GNA15基因表达量的引物探针组，包括组分A、组分B，所述组分A包括：

SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的上游引物GNA15-FP，

SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的下游引物GNA15-RP，

和含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的探针GNA15-probe，所述探针GNA15-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ；

所述组分B包括：

SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的上游引物ABL1-FP，

SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的下游引物ABL1-RP，

以及含有SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的探针ABL1-probe，所述探针ABL1-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有TAMRA。

本发明还提供了一种定量检测GNA15基因表达量的试剂盒，包括本发明所述的引物探针组，含有SEQ ID NO.7所示GNA15基因片段的阳性对照质粒以及含有SEQ ID NO.8所示ABL1基因片段的内参对照质粒。

更进一步地，所述组分A中上游引物GNA15-FP、下游引物GNA15-RP与探针GNA15-probe的摩尔比为3:3:2，所述组分B中上游引物ABL1-FP、下游引物ABL1-RP与探针ABL1-probe的摩尔比为3:3:2。

更进一步地，所述阳性对照质粒为在GV219质粒的XhoI/ KpnI酶切位点插入SEQID NO.7所示GNA15基因片段的阳性质粒，所述内参对照质粒为在GV219质粒的XhoI/ KpnI酶切位点插入SEQ ID NO.8所示ABL1基因片段的内参质粒。