[发明专利]一种基于Cu-MOF的CA125检测试剂盒及其应用

说明书

本发明属于分子生物学及核酸化学技术领域,涉及基于Cu‑MOF的CA125检测试剂盒及其应用。该试剂盒是基于利用金属有机骨架材料的荧光淬灭效应及金属MOF与DNA适体较强的吸附力，当DNA适体与MOF共同存在时，DNA适体与MOF结合，荧光淬灭；而当目标蛋白存在的情况下，DNA适体优先与目标蛋白结合或将DNA适体从MOF上置换下来，荧光值恢复。合成特异性针对CA125的DNA适体，加上Cy5.5的荧光标记，序列为：TGCCTTATTACTCTCTCCTGTTAAC‑Cy5.5。利用不同浓度的标准蛋白和DNA适体及MOF共孵育，获得荧光恢复标准曲线，优化反应体系，获得最优检测范围与检测灵敏度，利用不同蛋白标准曲线及检测体系中不同荧光值目标蛋白恢复情况，获得不同目标蛋白浓度。该检测方法快速、低成本、高灵敏、不需复杂的扩增和检测仪器。

技术领域

本发明属于分子生物学及核酸化学技术领域，具体涉及一种基于Cu-MOF的CA125检测试剂盒及其应用。

背景技术

卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，5年生存率仅40％左右(Siegel RL,MillerKD,Jemal A.Cancer statistics,2018.CA Cancer J Clin 2018；68(1):7-30.)严重威胁女性生命健康。卵巢癌发病隐匿，早期卵巢癌通常没有明显症状，因此约70％的卵巢癌发现时已经是晚期，发生了腹腔大范围的转移，这也是卵巢癌死亡率居高不下的主要原因。有文献报道早期卵巢癌的生存率可达到90％以上，因此提高卵巢癌的早期诊断效率是提高卵巢癌总体生存率的关键问题(参考文献：Kurman RJ.,Visvanathan K.,Roden R.,Wu TC.,Shih IeM.Am J Obstet Gynecol,2008,198(4),351-6.)。目前临床上卵巢癌早期诊断最主要的指标仍然是CA125。

临床上CA125的检测方法主要是ELISA方法，存在耗时长、操作复杂、ELISA试剂盒相对价格较高等弊端。因此，本发明着力于寻找一种操作简单、体系稳定、价格低廉且灵敏度好、响应快速的检测技术。近年来，基于金属MOF和DNA适体的检测方法是当前检测领域的一个热门方向，例如，Yu Chao小组采用了基于Ce-MOF@Au和AuPtRu NPs的三金属信号放大策略，从而利用DNA适体对TSP1进行灵敏检测(参考文献：Xiaoxue Fu.,Junlin He.,Chengli Zhang.,Jun Chen.,Yilin Wen.,Jia Li.,Weiran Mao.,Hangtian Zhong.,JiahaoWu.,Xingduo Ji.,ChaoYu.Biosens Bioelectron,2019,132,302-309.)。YinjiChen小组开发了一种基于有效的Y型DNA探针和纳米金属有机框架(NMOF)来检测多重抗生素的电化学方法(参考文献：Meng Chen.,NingGa.,Tianhua Li.,Ye Wang.,Qing Xu.,Yinji Chen.Anal Chim Acta,2017,968,30-39.)；该小组还报道了一种以金属有机骨架材料(MOFs)为信号示踪剂，以RecJf外切酶催化的靶区循环扩增为基础，研制了一种利用抗ssDNA抗体与适配体同时检测土霉素(OTC)和卡那霉素(KAN)的超灵敏电化学探针。(参考文献：Meng Chen.,Ning Ga.,You Zhou.,Tianhua Li.,Qing Xu.,Yuting Cao.,YinjiChen.Talanta,2016,161,867-874.)；但是，迄今为止，还没有可以基于Cu-MOF的CA125的检测方法。

发明内容

本发明需要解决的问题：基于MOF和DNA适体的检测方法是利用携带荧光的DNA适体与MOF结合的荧光淬灭效应及DNA适体与其靶标蛋白的高亲和力设计出来的一种检测方法，针对现有CA125检测的不足之处，比如耗时长、操作复杂、ELISA试剂盒相对价格较高等。提供一种快速检测CA125的方法，并组装成简单易操作的试剂盒，可对CA125进行快速、低成本、高灵敏度检测。