[发明专利]一种地顶孢霉培养物的生产方法

权利要求书

1.一种地顶孢霉培养物的生产方法，其特征在于，依次包括以下步骤：

S1.通过对虫草真菌分离筛选获得地顶孢霉FR01为出发菌种；

S2.对地顶孢霉FR01进行原生质体制备以及再生条件优化；

S3.通过紫外线和常压室温等离子体ARTP对原生质体进行诱变研究，同时通过氯化锂浓度的浓度固化菌株的诱变效应，然后分别以菌丝体的生物量及虫草素含量为指标筛选优质变株，再以生物量最高和虫草素合成最好的变株为出发菌株，通过加热的方式对原生质体进行亲本双灭活，以聚乙二醇为促融剂，进行细胞融合与再生，并通过微孔板初筛菌株生物量大且虫草素含量明显提高的变株，再通过摇瓶发酵复筛得到发酵菌丝体生物量多、同时能够有效合成虫草素的地顶孢霉变株；

S4.根据S3选育获得的变株生理特性，以摇瓶种子配方为基础制备营养液，并添加一定量的小米替代琼脂粉的固化，制成表面积大、通气量好且易于地顶孢霉变株萌发的强化培养基；

S5.移种地顶孢霉变株种子至强化培养基上进行培养从而制备制备菌悬液；

S6.观测步骤S5中不同碳源、氮源、无机盐对变株生物量即虫草素积累的影响从而制定最适合的培养基促生长因子以及地顶孢霉变株种子的占比；

S7.采用陶瓷膜超滤分离技术结合滤液吸附工艺分级收集发酵菌丝以及虫草素。

2.如权利要求1所述的一种地顶孢霉培养物的生产方法，其特征在于：

步骤S6内确定的促生长因子为蛋氨酸、精氨酸和B族维生素。

3.如权利要求1所述的一种地顶孢霉培养物的生产方法，其特征在于：

步骤S5中对地顶孢霉变株种子培养采用的是斜面培养。

4.如权利要求1所述的一种地顶孢霉培养物的生产方法，其特征在于：

步骤S3中的微孔板为96孔微孔板。