[发明专利]共固定化酶、其制备方法及其应用

权利要求书

1.一种共固定化酶，其特征在于，所述共固定化酶包括：

氨基树脂载体，以及

主酶和辅酶，所述辅酶为两种，所述主酶和所述辅酶共固定于所述氨基树脂载体上，其中，所述主酶共价固定于所述氨基树脂载体上，

所述辅酶中的一种通过共价方式、另一种通过非共价方式固定于所述氨基树脂载体上；

所述辅酶包括第一酶和第二酶，所述主酶与所述第二酶共价固定于所述氨基树脂载体上，所述第一酶以离子吸附的方式固定于所述氨基树脂载体上；

所述主酶选自如下任意一种酶：转氨酶、氨基酸脱氢酶、亚胺还原酶、酮还原酶、烯还原酶及单加氧酶；

所述辅酶选自如下至少一种：乳酸脱氢酶、甲酸铵脱氢酶、葡萄糖脱氢酶及醇脱氢酶；

所述氨基树脂载体选自如下任意一种： LX1000EA、LX1000HA、LX1000NH、HFA、LX1000EPN、HM100D、 Lifetech^TMECR8309、ECR8409、ECR8305、ECR8404、ECR8315、ECR8415、ESR-1、ESR-3、ESR-5及ESR-8；

所述非共价方式固定是通过PEI以离子吸附的方式吸附于所述氨基树脂载体上。

2.根据权利要求1所述的共固定化酶，其特征在于，所述转氨酶为来源于B.thuringiensis或Vibrio fluvialis strain JS17的转氨酶；

所述氨基酸脱氢酶为来源于Bacillus cereus或Bacillus sphaericus的氨基酸脱氢酶；

所述亚胺还原酶为来源于Streptomyces sp或Bacillus cereus的亚胺还原酶；

所述酮还原酶为来源于Sporobolomyces salmonicolor的酮还原酶或者Acetobactersp.CCTCC M209061的酮还原酶；

所述烯还原酶为来源于Chryseobacterium sp.CA49或Sewanella oneidensis MR-1的烯还原酶；

所述单加氧酶为来源于Rhodococcus sp.Phi1的环己酮单加氧酶，或者来源于Brachymonas petroleovorans的环己酮单加氧酶，或来源于Rhodococcus ruber-SD1的环己酮单加氧酶。

3.根据权利要求2所述的共固定化酶，其特征在于，所述来源于Acetobacter sp.CCTCCM209061的酮还原酶为具有SEO ID NO:1或SEO ID NO:2序列的突变体。

4.根据权利要求2所述的共固定化酶，其特征在于，所述来源于Rhodococcus sp.Phi1的环己酮单加氧酶为具有SEO ID NO：4序列或SEO ID NO：5序列的突变体；所述来源于Rhodococcus ruber-SD1的环己酮单加氧酶为具有SEO ID NO：7序列或SEO ID NO:8序列的突变体。

5.根据权利要求1所述的共固定化酶，其特征在于，

所述乳酸脱氢酶为来源于Lactobacillus helveticus的D-乳酸脱氢酶；

所述甲酸铵脱氢酶为来源于Candida boidinii的甲酸脱氢酶；

所述葡萄糖脱氢酶为来源于Lysinibacillus sphaericus G10的葡萄糖1-脱氢酶；

所述醇脱氢酶为来源于Thermoanaerobium brockii的醇脱氢酶。

6.根据权利要求1所述的共固定化酶，其特征在于，

所述共固定化酶的循环利用次数为4～25次。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的共固定化酶，其特征在于，所述氨基树脂载体为戊二醛活化的氨基树脂载体；

所述氨基树脂载体为带有C2或C4连接臂的氨基树脂载体。

8.根据权利要求1所述的共固定化酶，其特征在于，所述共固定化酶中，所述主酶与所述辅酶的质量比为1～20：1～10。