[发明专利]一种脂质体转染细胞保护剂

说明书

本发明提供了一种脂质体转染过程中的细胞活性保护剂，其特征在于所述细胞保护剂含有以下组分：终浓度为1～10mmol/L的维生素A，终浓度为5～15g/L的甘油，终浓度为10～40g/L的葡萄糖，终浓度为3～20g/L的人血白蛋白。本发明配制的细胞保护剂易于保存且具有较长的货架期，配制好的细胞保护剂在4～8℃下可以保存1年。与在转染容器，本保护剂与转染DNA和脂质体转染试剂的混合液进行转染，不仅可以保持细胞的活性，而且极大提高转染效率，特别是对于比较难转染的免疫细胞，转染效率提高了40％以上。

技术领域

本发明涉及细胞生物技术领域，更特别地，涉及一种脂质体转染过程中的细胞活性保护剂。

背景技术

转染是将外源遗传物质转入到真核细胞内的一种专门技术，随着基因与蛋白功能研究的深入，转染已成为现代分子生物学研究中经常涉及的基本方法，它解决了外源遗传物质导入细胞的难题，为在细胞水平上进行基因功能研究奠定了基础。随着近年来基因工程技术的不断发展，出现了多种多样的转染技术。一般的转染方法多采用脂质体法和电穿孔的方法。阳离子脂质体表面带正电荷，与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹成DNA-脂质体复合物，能吸附在表面带负电荷的细胞膜，通过膜的融合或细胞内吞作用进入细胞体内。有时也通过细胞膜上小孔的直接渗透作用将DNA传递进入细胞。电穿孔法或电转法，是通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而将外源分子，如DNA、mRNA、蛋白、糖类等送入宿主细胞的胞浆内。病毒法对原代细胞进行感染时，往往需要较高的病毒滴度且通常效果不甚理想。而电穿孔的方法在操作简易度和实验周期上相比病毒法感染原代细胞更具优势。然而，该法的普及受制于电转效率、细胞存活率、实验仪器差异等诸多因素。加之原代细胞对于多种转染方法都具有较强的抵抗性，使得关于细胞进行高效基因编辑的手段较为匮乏。

有研究发现，在转染过程中，细胞活性状态对转染效率有很大的影响。特别是在免疫细胞的转染过程，细胞活性对转染效率影响非常大。目前，市面上细胞活性保护剂一般为复方柠檬酸钠保存液(ACD)、EDTA或肝素。为了保证免疫细胞的活力，加入复方柠檬酸钠保存液(ACD)、EDTA或肝素的抗凝血必须在6小时之内使用。抗凝血的保存时间如果超过10小时，其中的淋巴细胞会部分或者全部死亡，无法进行后续的转染实验。所以需要开发一种新的细胞保护剂，在保护血液中的免疫细胞，特别是淋巴细胞，T细胞的活力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脂质体转染过程中的细胞活性保护剂，所述细胞保护剂含有以下组分：终浓度为1～10mmol/L的维生素A，终浓度为5～15g/L的甘油，终浓度为10～40g/L的葡萄糖，终浓度为3～20g/L的人血白蛋白；

所述的细胞保护剂，优选的，所述细胞保护剂含有以下组分：终浓度为4～8mmol/L的维生素A，终浓度为10～15g/L的甘油，终浓度为15～20g/L的葡萄糖，终浓度为10～17g/L的人血白蛋白；

所述的细胞保护剂，更优选的，所述细胞保护剂含有以下组分：终浓度为5mmol/L的维生素A，终浓度为10g/L甘油，终浓度为16g/L的葡萄糖，终浓度为14g/L的人血白蛋白；

所述的细胞保护剂，更优选的，所述细胞保护剂的pH值为7.1-7.5；

所述的细胞保护剂与转染DNA和脂质体转染试剂的混合液进行转染。

本发明配制的细胞保护剂易于保存且具有较长的货架期，配制好的细胞保护剂在4～8℃下可以保存1年。与在转染容器，本保护剂与转染DNA和脂质体转染试剂的混合液进行转染，不仅可以保持细胞的活性，而且极大提高转染效率，特别是对于比较难转染的免疫细胞，转染效率提高了40％以上。

附图说明

图1是采用试剂转染pEGFP-C1的T细胞在白光(左)和GFP激发光(右)下显微照片；