[发明专利]一种降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法

说明书

本发明涉及微生物分离技术领域，尤其涉及一种降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法。一种降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法，包括步骤：取常年落有草木、秸秆、落叶的森林土壤，采用浓度梯度法接种于富集培养基上，培养直至出现单菌落，转移至羧甲基纤维素为唯一碳源平板上进行纯化，直至出现单菌落；(2)将单菌落在羧甲基纤维素为唯一碳源平板上连续传代；(3)单菌落转移至以微晶纤维素粉为唯一碳源平板上，直至出现单菌落，连续传代；(4)将单菌落通过平板划线法转移至阿特拉津定向筛选培养基上，培养至单菌落出现；(5)扩增单菌落的16SrDNA，将16SrDNA比对鉴定，比对后为细菌菌属的保留。

技术领域

本发明涉及微生物分离技术领域，尤其涉及一种降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法。

背景技术

纤维素是绿色植物通过光合作用合成的、储量最大的高分子化合物，随着化石燃料的日益枯竭及环境污染问题的凸显，天然纤维素的开发引起了科学家的广泛关注。天然纤维素如何转化为可供人们利用的能源成为困扰人们的一个新的课题。另外阿特拉津(2-氯-4-二乙胺基-6-异丙胺基-1，3，5-三嗪)是全球广泛使用的三嗪类除草剂，主要应用于玉米、高粱农田杂草的去除，因其溶淋性好、持效期长，已造成多个国家的土壤和地表、地下水污染。阿特拉津对人和动物的内分泌有很强的干扰，严重威胁人们的健康。目前，天然纤维素的处理大多采用焚烧或者自然腐烂的方式，严重污染环境，并造成了极大浪费。阿特拉津市农田主要污染物，所以发现能够降解纤维素及阿特拉津的菌株对利用天然纤维素及生态修复的利用具有深远意义。

发明内容

为了解决以上问题，本发明的目的是提供一种既能降解阿特拉津农药又能降解纤维素的细菌的筛选方法。

为实现上述目的，本发明所设计的降解阿特拉津及纤维素的细菌的筛选方法，包括步骤：

(1)富集培养：取我国长白山地区常年落有草木、秸秆、落叶的森林土壤溶于葡萄糖和羧甲基纤维素混合水溶液中制成土壤悬液，将土壤悬液采用浓度梯度法接种于富集固体培养基上，培养直至出现单菌落，将单菌落采用平板划线法转移至以羧甲基纤维素为唯一碳源的羧甲基纤维素固体培养基上进行纯化，直至出现单菌落；

其中，葡萄糖和羧甲基纤维素混合水溶液的配方：0.1g葡萄糖、0.5g NaCI、0.5g蛋白胨、0.25g酵母粉、0.2羧甲基纤维素，100ml双蒸水定容；

富集固体培养基的配方为：0.1g NaNO₃、0.02g CaCl₂、0.5g KH₂PO₄、0.4gMgSO₄.7H₂O、0.01g FeSO₄.7H₂O、1g葡萄糖、5g NaCl、5g蛋白胨、2.5g酵母粉、15g琼脂，pH7.0～7.2，1L双蒸水定容，115℃灭菌；

羧甲基纤维素固体培养基的配方：0.1g NaNO₃、0.02g CaCl₂、0.5g KH₂PO₄、0.4gMgSO₄.7H₂O、0.01g FeSO₄.7H₂O、3g羧甲基纤维素钠、15g琼脂，pH7.0～7.2，1L双蒸水定容，121℃灭菌20min；

(2)复筛：将羧甲基纤维素固体培养基上的单菌落连续转移传代3～5次，至菌落稳定生长；

(3)纤维素降解定向筛选：将步骤(2)得到的单菌落转移至以微晶纤维素粉为唯一碳源的微晶纤维素固体培养基上，直至出现单菌落，连续传代3～5次，至菌落稳定生长；