[发明专利]树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法

权利要求书

1.一种树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将炔基化合物与酯化底物进行酯化反应，得到含有酯基的炔基化合物；

将所述含有酯基的炔基化合物加入多个端基为氨基的树杈状大分子中，以使所述酯基与其中一个所述氨基进行酰胺化反应，得到含有炔基的树杈状大分子，所述含有酯基的炔基化合物与所述多个端基为氨基的树杈状大分子的摩尔比不超过0.8：1；及

将所述含有炔基的树杈状大分子与连接有一个叠氮基的核苷酸进行点击反应，得到树杈状大分子修饰的核苷酸，在所述连接有一个叠氮基的核苷酸中，叠氮基通过连接臂与核苷酸的磷酸基团连接。

2.根据权利要求1所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，在所述将所述含有炔基的树杈状大分子与连接有一个叠氮基的核苷酸进行点击反应，得到树杈状大分子修饰的核苷酸的步骤之前，还包括将所述含有炔基的树杈状大分子进行纯化的步骤；及/或

所述点击化学反应为无金属催化的点击反应。

3.根据权利要求1所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述将所述含有酯基的炔基化合物加入多个端基为氨基的树杈状大分子中的步骤中，采用延时滴加的方式将所述含有酯基的炔基化合物加入所述多个端基为氨基的树杈状大分子中。

4.根据权利要求1所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述连接臂的原料为聚乙二醇。

5.根据权利要求1所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述多个端基为氨基的树杈状大分子为多个端基为氨基的树杈状大分子溶液，所述将所述含有酯基的炔基化合物加入多个端基为氨基的树杈状大分子中，以使所述酯基与其中一个所述氨基进行酰胺化反应，得到含有炔基的树杈状大分子的步骤包括：

将所述含有酯基的炔基化合物溶于溶剂，得到含有酯基的炔基化合物溶液，其中，所述含有酯基的炔基化合物的质量与所述溶剂的体积之比为50mg：1mL～50mg：2mL；及

将所述含有酯基的炔基化合物溶液加入所述多个端基为氨基的树杈状大分子溶液中，并混合，以使所述酯基与其中一个所述氨基进行酰胺化反应，得到含有炔基的树杈状大分子。

6.根据权利要求1～4任一项所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述炔基化合物具有一个炔基；及/或

所述炔基化合物还含有羧基和羟基中的一种，所述酯化底物含有羧基和羟基中的另一种。

7.根据权利要求6所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述炔基化合物选自及中的一种；及/或

所述酯化底物选自及中的一种。

8.根据权利要求1～4任一项所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述含有炔基的树杈状大分子的端基为羧基，所述将所述含有酯基的炔基化合物与多个端基为氨基的树杈状大分子混合，以使所述酯基与其中一个所述氨基进行酰胺化反应，得到含有炔基的树杈状大分子的步骤包括：

将所述含有酯基的炔基化合物与多个端基为氨基的树杈状大分子混合，所述酯基与其中一个所述氨基进行酰胺化反应，得到酰胺化产物；及

将酰胺化产物与环酸酐进行酰胺化反应，得到端基为羧基的含有炔基的树杈状大分子。

9.根据权利要求1～4任一项所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，还包括连接有一个叠氮基的核苷酸的制备步骤。

10.根据权利要求9所述的树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，其特征在于，所述连接有一个叠氮基的核苷酸的制备步骤包括：

将叠氮化物与连接臂的原料反应，使得叠氮基连接到所述连接臂上，得到含有叠氮基的连接臂；及

将所述含有叠氮基的连接臂与核苷酸连接，得到连接有一个叠氮基的核苷酸。