[发明专利]测序试剂

说明书

本发明涉及一种测序试剂，该测序试剂包括树杈状大分子修饰的核苷酸。一个该树杈状大分子修饰的核苷酸包括一个核苷酸及一个与核苷酸连接的树杈状大分子。上述测序试剂的树杈状大分子修饰的核苷酸与纳米孔相互作用而产生的特征电信号的均一性高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种测序试剂。

背景技术

随着技术的不断发展，基因测序已经发展到第三代测序，即纳米孔测序。纳米孔测序的原理是：标记的核苷酸与纳米孔锚定的DNA聚合酶结合后，该标记的核苷酸与纳米孔相互作用而产生特征电信号，通过不同的标记的核苷酸所对应的特征电信号不同而得到待测核苷酸序列信息。

然而，目前用于与纳米孔产生相互作用的标记的核苷酸分子，例如寡核苷酸，多肽、线性聚合物(如PEG)等标记的核苷酸，与纳米孔作用而产生的特征电信号的均一性差。

发明内容

基于此，有必要提供一种电信号均一性高的测序试剂。

一种测序试剂，包括树杈状大分子修饰的核苷酸，一个所述树杈状大分子修饰的核苷酸包括一个核苷酸及一个与所述核苷酸连接的树杈状大分子。

上述测序试剂包括树杈状大分子修饰的核苷酸，该树杈状大分子修饰的核苷酸的树杈状大分子以其独特的结构及表面存在的电荷，使树杈状大分子修饰的核苷酸在溶液中的空间构象稳定，从而提高树杈状大分子修饰的核苷酸与纳米孔相互作用时产生的特征电信号的均一性，减少在是否为噪音、是否是不同标记分子信号重叠等情况下的误判，降低特征电信号判定的难度，提高测序的准确性。

在其中一个实施例中，所述树杈状大分子的端基包括多个氨基，所述核苷酸与其中一个所述氨基相连。

在其中一个实施例中，所述树杈状大分子为聚酰胺-胺树杈状大分子。

在其中一个实施例中，所述树杈状大分子修饰的核苷酸还包括连结合子，所述连接合子具有酯基和一个炔基，所述连接合子与所述树杈状大分子通过所述连接合子的酯基与所述树杈状大分子的氨基形成一个酰胺键而连接，所述核苷酸连接有一个叠氮基，所述连接合子与所述核苷酸通过所述连接合子的炔基与所述叠氮基发生点击反应而连接。

在其中一个实施例中，所述连结合子选自及中的一种。

在其中一个实施例中，所述树杈状大分子修饰的核苷酸还包括连接臂，所述核苷酸通过所述连接臂与所述叠氮基连接。

在其中一个实施例中，所述连接臂的原料选自聚乙二醇、碳链及芳香类化合物中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述连接臂为(CH₂CH₂O)_n，其中，n为3～44的任一整数。

在其中一个实施例中，所述树杈状大分子为0代～10代的树杈状大分子；进一步地，所述树杈状大分子为0代～10代的半代树杈状大分子或0代～10代的整代树杈状大分子；及/或

所述核苷酸选自dANP、dCNP、dTNP、dGNP、dUNP、ANP、CNP、GNP、 UNP及TNP中的一种，其中，dANP、dCNP、dTNP、dGNP、dUNP、ANP、 CNP、GNP、UNP及TNP中的磷酸基团的数量为3～8的任一整数。

在其中一个实施例中，所述树杈状大分子还包括修饰基团，所述修饰基团选自荧光基团、改变所述树杈状大分子的表面电荷的基团、改变所述树杈状大分子的溶解性的基团和改变所述树杈状大分子的疏水性的基团中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述测序试剂包括多种树杈状大分子修饰的核苷酸，各所述树杈状大分子修饰的核苷酸的树杈状大分子及核苷酸各不相同。

在其中一个实施例中，所述树杈状大分子修饰的核苷酸由以下步骤制得：