[发明专利]一种基于光化学调控核酸分子链置换动力学的方法

权利要求书

1.一种基于光化学调控核酸分子链置换反应的方法，其特征在于，通过调控紫外光照对核酸分子链置换反应进行调控；该方法的具体步骤为：

（1）根据沃森-克里克碱基互补配对原则及Hoogsteen配对原则，设计对应核酸分子链As，A，S，C，I的序列，完成核酸分子链的合成；所述核酸分子链As的序列为SEQ ID No.1：CCCTGATCTTGTTCCTTTCTCCTTCT；所述核酸分子链A的序列如SEQ ID No.2所示：TTCCTTTCTCCTTCTCCCTAACCTCCCATG-Cy5；所述核酸分子链S的序列如SEQ ID No.3所示：AAGGAAAGAGGAAGA；所述核酸分子链C的序列如SEQ ID No.4所示：Cy3-GGTGGGAGGTTAGGG；所述核酸分子链I的序列如SEQ ID No.5所示：GGTGGGAGGTTAGGGTTTTTTCAAGATCAGGG；

（2）将步骤（1）合成的核酸分子链As，A，S，C，I分别溶解于缓冲溶液中，备用；所述核酸分子链As，A，S，C，I在缓冲溶液中的终浓度均为100μM；

（3）将步骤（2）分别溶解于缓冲溶液的核酸分子链A，S，C及核酸分子链As进行混合，然后进行退火，形成模板链及核酸分子链As的混合溶液；

其中，所述模板链为由核酸分子链S，C，A这三条链经退火形成的复合物；所述核酸分子链A，S，C及核酸分子链As的摩尔比是1：1：1.25：5；

（4）在pH为5.54的缓冲溶液中混入无水乙醇，然后加入分子光开关材料螺吡喃形成混合溶液；所述缓冲溶液与无水乙醇的体积比为5：1；所述螺吡喃的摩尔浓度为25μM；

（5）将步骤（3）得到的模板链及核酸分子链As的混合溶液稀释至步骤（4）所述的混合溶液中，用紫外线灯进行照射，然后将核酸分子链I与模板链及核酸分子链As的混合溶液混合，收集荧光信号，完成基于光化学调控核酸分子链置换反应；核酸分子链I与模板链的摩尔比是5：1；

步骤(2)和（4）中，所述缓冲溶液为Tris-HCl缓冲溶液、PBS缓冲溶液、TAE缓冲溶液中的一种。

2.如权利要求1所述的一种基于光化学调控核酸分子链置换反应的方法，其特征在于，使用带缺口的模板链作为反应底物。

3.如权利要求1所述的一种基于光化学调控核酸分子链置换反应的方法，其特征在于，利用核酸分子链As与模板链之间的Hoogsteen键形成三链体结构，从而引入小支点区域。

4.如权利要求1所述的一种基于光化学调控核酸分子链置换反应的方法，其特征在于，步骤（4）中，利用分子光开关材料螺吡喃调控体系中的质子浓度。

5.核酸分子链As，A，S，C，I，其特征在于，所述核酸分子链As的序列为SEQ ID No.1：CCCTGATCTTGTTCCTTTCTCCTTCT；所述核酸分子链A的序列如SEQ ID No.2所示：TTCCTTTCTCCTTCTCCCTAACCTCCCATG-Cy5；所述核酸分子链S的序列如SEQ ID No.3所示：AAGGAAAGAGGAAGA；所述核酸分子链C的序列如SEQ ID No.4所示：Cy3-GGTGGGAGGTTAGGG；所述核酸分子链I的序列如SEQ ID No.5所示：GGTGGGAGGTTAGGGTTTTTTCAAGATCAGGG。

6.如权利要求5所述的核酸分子链As，A，S，C，I在光化学调控核酸分子链置换反应中的应用。