[发明专利]一种引物对及其在鉴定参环毛蚓中的应用

说明书

本发明实施例提供了一种引物对，使用所述引物对鉴定参环毛蚓的方法，以及用于鉴定参环毛蚓的试剂盒。采用本发明实施例提供的引物对及方法，能够特异性扩增参环毛蚓中的DNA片段，从而能够用于准确鉴别参环毛蚓。

技术领域

本发明涉及参环毛蚓鉴定技术领域，特别是涉及一种引物对及其在鉴定参环毛蚓中的应用。

背景技术

地龙是常用的动物类药材，据2015年版《中国药典》规定，地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Amynthas aspergillum、通俗环毛蚓Pheretimav-ulgarisChen、威廉环毛蚓Pheretimaguillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretimapectinifera Michaelsen的干燥体。参环毛蚓主产于广西，也称为广地龙，由于加工精细讲究，临床疗效确切，在地龙中药材中被公认品质最优，价格最高。地龙中药材基源动物品种较多，市场上地龙药材品种混杂，加之参环毛蚓野生资源日益减少，造成参环毛蚓品种混杂和掺假现象较为普遍。然而目前鉴别参环毛蚓大多依靠个人经验，故而亟需一种能够快速准确鉴定参环毛蚓的方法。

发明内容

本发明的实施例提供了一种引物对，采用所述引物对，以待测样品的总DNA为模板进行PCR扩增，通过检测扩增结果可实现对参环毛蚓的准确鉴定。具体技术方案如下：

本发明第一方面提供了一种引物对，包括正向引物和反向引物，所述正向引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述反向引物的序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明第二方面提供了本发明第一方面的引物对在鉴定参环毛蚓中的用途。

本发明第三方面提供了一种利用PCR扩增技术鉴定参环毛蚓的方法，采用本发明第一方面所提供的引物对。

在本发明第三方面的一些实施方式中，利用PCR扩增技术鉴定参环毛蚓的方法包括以下步骤：

1)分别提取待测样品的总DNA；

2)采用所述引物对，分别以各待测样品的总DNA为模板进行PCR扩增；扩增结果为阳性的待测样品为参环毛蚓。

在本发明第三方面的一些实施方式中，每25μL PCR扩增体系中包括：

在本发明第三方面的一些实施方式中，步骤2)中，PCR扩增的条件为：

预变性95℃5分钟；变性95℃5s，退火55℃15s，延伸68℃10s，30个循环；完成循环后继续68℃延伸10分钟。

在本发明第三方面的一些实施方式中，采用核酸荧光染料对扩增结果进行检测。

本发明第四方面提供了一种用于鉴定参环毛蚓的试剂盒，所述试剂盒中包本发明第一方面所提供的引物对。

在本发明第四方面的一些实施方式中，所述试剂盒中还包括PCR缓冲液、DEPC水、DNA聚合酶、dNTPs，及操作说明书。

采用本发明实施例提供的引物对，能够特异性扩增参环毛蚓中的DNA片段，从而能够用于准确鉴别参环毛蚓。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为采用本发明引物对对样品编号为1-18的待测样品进行PCR扩增的凝胶电泳结果图；

图2为采用本发明引物对对样品编号为19-25的待测样品进行PCR扩增的凝胶电泳结果图；