[发明专利]分泌抗凤果花叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

本发明公开了一种分泌抗凤果花叶病毒(Pepino mosaic virus，PepMV)单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用。以提纯的PepMV病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经杂交瘤技术获得1株能分泌抗PepMV单抗的杂交瘤细胞株23D11，其保藏号为CGMCC No.18845。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10^‑8，抗体类型及亚类为IgG1、κ轻链，该单抗与PepMV有特异性免疫反应，而不与同属的马铃薯X病毒反应，也不与番茄斑驳花叶病毒、番茄花叶病毒、番茄斑萎病毒、番茄黄化曲叶病毒、番茄黑环病毒和健康植物组织发生免疫反应。利用23D11单抗建立多种检测方法，其中ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:40,960和1:20,480倍稀释(w/v,g/mL)。该细胞株的创制及该病毒血清学检测方法的建立为PepMV的检测诊断、流行病学调查及科学防控提供物质和技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗凤果花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

凤果花叶病毒(Pepino mosaic virus，PepMV)属于弯曲病毒科 (Flexiviridae)马铃薯X病毒属(Potexvirus)成员，基因组为正义单链RNA。PepMV的基因组包含五个开放阅读框，分别表达5个蛋白，第一个阅读框编码1个164kDa的RNA聚合酶，中间3个阅读框分别编码26、14和9kDa蛋白组成三基因盒，参与病毒的胞间移动，最后一个阅读框编码一个27kDa的外壳蛋白。2000年该病毒首次在荷兰番茄上发现，如今已经是全球温室番茄作物的主要病毒病害。

PepMV可侵染多种茄科植物，尤其在番茄上引起严重危害，症状包括果实变色开裂，叶片花叶斑驳和坏死。PepMV症状的严重程度取决于环境条件，以及病毒分离物的特性。研究表明来自同一基因型的分离株之间的微小核苷酸序列差异就可增强病毒的侵袭能力和加重症状。该病毒一旦传入极易扩散流行，目前我国防止该病毒病的入侵主要策略是加强该病毒的口岸检验检疫。

为了强化我国PepMV的检验检疫技术，急需建立检测PepMV 简单快速、经济有效、高通量的实用检测技术。与常规的指示植物接种、电镜观察、分子检测等方法相比，血清学方法具有简单、经济、易操作、可大规模检测等优点，是植物病毒检测和调查最实用的方法。但血清学的方法的建立依赖于特异性高质量的病毒抗体。本发明以纯化的PepMV病毒粒子作为抗原通过杂交瘤技术制备了1株分泌 PepMV特异性单抗的杂交瘤细胞株，以分泌的单抗为核心建立检测 PepMV的高通量的血清学方法及试剂盒，从而为我国PepMV的口岸检验检疫、流行病学的调查、病毒基因组功能分析、抗性育种、科学防控建立等提供物质和技术支持。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种分泌抗凤果花叶病毒单抗的杂交瘤细胞株及其单抗应用。

分泌抗凤果花叶病毒单抗的杂交瘤细胞株23D11，它能分泌抗凤果花叶病毒的特异性单抗，杂交瘤细胞株23D11于2019年11月4 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为 CGMCC No.18845。

一种所述的杂交瘤细胞分泌的抗凤果花叶病毒单克隆抗体，抗凤果花叶病毒单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-8，抗体类型及亚类为IgG1、κ轻链，与凤果花叶病毒27kDa的外壳蛋白有特异性免疫反应，利用该单抗建立ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测感染 PepMV番茄病叶组织粗提液的灵敏度分别达到1:40,960和1:20,480 倍稀释(w/v,g/mL)。

抗凤果花叶病毒单克隆抗体能与凤果花叶病毒有特异性免疫反应，而不与同属的马铃薯X病毒反应，也不与番茄斑驳花叶病毒、番茄花叶病毒、番茄斑萎病毒、番茄黄化曲叶病毒、番茄黑环病毒和健康植物组织发生免疫反应。

抗凤果花叶病毒单克隆抗体在该病毒检测上的应用是以单抗为核心建立的各种免疫学检测方法和免疫学检测试剂盒。