[发明专利]一种区分布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染株的核酸检测试纸条

说明书

一种区分布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染株的核酸检测试纸条，涉及布病检测领域，解决了现有病原检测方法无法同时进行布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染株检测的问题。本发明包括：布鲁氏菌属正向引物序列如SEQ ID NO:1所示，布鲁氏菌属反向引物序列如SEQ ID NO:2所示，布鲁氏菌属探针序列SEQ ID NO:3所示；布鲁氏菌疫苗株S19正向引物序列如SEQ ID NO:4所示，布鲁氏菌疫苗株S19反向引物序列如SEQ ID NO:5所示，布鲁氏菌疫苗株S19探针序列SEQ ID NO:6所示。本发明可以特异性的检测出布鲁氏菌自然感染和人工免疫的区别，具有较高的特异性和敏感性。

技术领域

本发明涉及布病检测技术领域，具体涉及一种布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染株的双联检测卡及其制备和使用方法。

技术背景

布鲁氏菌是一种重要的人兽共患病原菌，在畜牧业中具有重要的影响作用。近年来，我国布鲁氏菌病疫情具有很强的威胁，国家颁发了《国家布鲁氏菌病中长期计划(2016-2020年)》，其中规定了布鲁氏菌的检疫及相关防治计划，足见此病在我国疫病防控中的重要作用。

目前，对于牛、羊等经济动物布鲁氏菌病主要是通过疫苗免疫、检疫清场等方法进行防控与根治，目前对于布鲁氏菌病防疫方面主要应用S19株(牛布鲁菌)和S2株(猪布鲁菌)，其中S19株主要用于牛的接种，该疫苗株能够感染人且能造成母畜的流产，对其它动物布鲁菌感染无免疫保护作用。

近年来，一系列基于杂交、扩增和测序的新型分子诊断技术不断涌现，既缩短了检测周期，降低了检测成本，又极大提高了病原微生物检测和诊断的准确度和灵敏度，但还没有一种单一分子诊断技术可同时满足简便快速、高灵敏、高准确度、方便实用等要求。公开号为105018628A的中国专利公开了鉴别布鲁氏菌A19疫苗株与野毒株的试剂盒，其主要是通过基于测序的方法进行鉴定，具体方法是使用PCR扩增-电泳检测区分布鲁氏菌和其他常规细菌菌株后，对于PCR扩增产物进一步测序分析，通过测序结果鉴别诊断临床样本中布鲁氏菌A19疫苗株。

发明内容

为了解决现有病原检测方法无法同时进行布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染株检测的问题，本发明提供一种区分布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染株的核酸检测试纸条。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的一种区分布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染株的核酸检测试纸条，主要包括：

布鲁氏菌正向引物序列如SEQ ID NO:1所示，布鲁氏菌反向引物序列如SEQ IDNO:2所示，布鲁氏菌探针序列SEQ ID NO:3所示；

布鲁氏菌疫苗株S19正向引物序列如SEQ ID NO:4所示，布鲁氏菌疫苗株S19反向引物序列如SEQ ID NO:5所示，布鲁氏菌疫苗株S19探针序列SEQ ID NO:6所示。

本发明的一种区分布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染株的核酸检测试纸条，主要包括：

布鲁氏菌正向引物序列如SEQ ID NO:1所示，布鲁氏菌反向引物序列如SEQ IDNO:2所示，布鲁氏菌探针序列SEQ ID NO:3所示；

布鲁氏菌疫苗株S19正向引物序列如SEQ ID NO:4所示，布鲁氏菌疫苗株S19反向引物序列如SEQ ID NO:7所示，布鲁氏菌疫苗株S19探针序列SEQ ID NO:8所示。

本发明的有益效果是：

本发明结合我国最新颁布的布鲁氏菌病诊断技术(GBT 18646-2018)中所描述的差异片段，并根据基因序列分析，针对牛、羊等家畜常用疫苗株及感染菌株，扩增其特异性基因片段，结合血清学诊断方法，对血清学阳性动物进行病原RPA-LFD技术检测确诊，可有效区分布鲁氏菌疫苗株S19和自然感染强毒株感染，为疫控工作提供有效技术支撑。