[发明专利]一种提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法

说明书

本发明提供了一种提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法，该方法为：将新城疫LaSota株稀释后接种于鸡胚中孵育，收集得到鸡新城疫苗鸡胚尿囊液，加甲醛溶液灭活处理得到灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液，将大豆分离蛋白溶于无菌水中，加入海藻酸钠、丙三醇、秋葵多糖和灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液，然后滴加氯化钙溶液，用无菌生理盐水洗涤，经预冻、冷冻干燥后，得到提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂。本发明中大豆分离蛋白主要起到保护新城疫LaSota株核酸的功能，灭活新城疫LaSota株可以避免活疫苗毒力返强、免疫麻痹的风险，以及毒株转强的风险，通过秋葵多糖有效包被，有效过胃，使蛋鸡血清中非特异性免疫性显著提高。

技术领域

本发明属于饲料添加剂技术领域，具体涉及一种提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法。

背景技术

蛋鸡非特异性免疫是机体在长期的种系发育与进化过程中逐渐建立起来的天然防御功能，具有识别迅速(96h内)、广谱、有遗传性种间差异特点。

传统的方法，在蛋鸡日粮中添加黄秋葵叶粉可以提高蛋鸡生产性能、蛋品质,同时对蛋鸡盲肠微生物菌群及肠道组织结构可起到一定改善作用。秋葵中叶粉中有很多成分，不同的成分有不同的溶媒，比如多糖溶解在水中，需要特殊的工艺，多糖被提取出来后，干粉叶在蛋鸡的消化道中很难优势利用其中的多糖。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法，该方法中大豆分离蛋白具有乳化性、起泡性、凝胶性、热稳定性，主要起到保护新城疫LaSota株核酸过胃的功能，灭活新城疫LaSota株可以避免长期大量使用新城疫LaSota株所造成的活疫苗毒力返强、免疫麻痹的风险，以及毒株转强的风险，灭活新城疫LaSota株通过秋葵多糖有效包被，有效过胃，可以使蛋鸡血清中非特异性免疫干扰素-γ、白介素-6、溶菌酶含量显著提高，蛋鸡实际养殖过程中使用效果突出，另外，选用秋葵多糖能够避免饲料中加入过量的秋葵干叶影响饲料的基础营养，同时秋葵多糖还具有修复消化道黏膜，抗革兰氏阴性菌等优点，保持蛋鸡较高的抵抗力，达到预防疫病的效果。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法，该方法为：

S1、将秋葵中加入水a，加热至70℃，保温3h，进行第一次浸提，浸提后用滤布过滤，得到滤液a，向过滤后的秋葵残渣中加入水b再次加热至70℃，保温3h，进行第二次浸提，用滤布过滤，得到滤液b，将滤液a和滤液b混合后，得到总滤液，向总滤液中加入质量分数为95％的乙醇溶液，然后在温度为4℃的条件下静置12h后，在温度为4℃、转速为8000rpm的条件下离心10min～20min，将沉淀物在温度为-20℃的条件下冷冻干燥2h，得到秋葵多糖；

S2、将菌株含量≥4×10^8.0EID₅₀/0.1mL的新城疫La Sota株稀释10倍后，接种于9～10日龄鸡胚中，每胚的接种量为0.1mL，接种后用蜡烛密封针孔，然后在温度为37℃的条件下孵育48h后，收集得到鸡新城疫苗鸡胚尿囊液；

S3、向S1中得到的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液中加入质量分数为38％～40％的甲醛溶液，至甲醛的质量分数为0.1％时止，在温度为4℃的条件下灭活处理72h，灭活期间振摇3次～4次，得到灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液；

S4、将大豆分离蛋白加入至无菌水中，搅拌溶解后，在温度为60℃的条件下改性30min后，自然冷却至室温，然后加入海藻酸钠和丙三醇，搅拌混合10min后，再加入S1中得到的秋葵多糖和S3中得到的灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液，搅拌混合5min，得到混合液a，向所述混合液a中滴加质量分数为1％的氯化钙溶液固定化30min，然后用无菌生理盐水洗涤3次后，在温度为-20℃的条件下预冻8h～12h，然后在温度为-50℃的条件下冷冻干燥10h，得到提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂。