[发明专利]宫血干细胞制备方法

说明书

本发明涉及再生医学技术领域，具体涉及一种宫血干细胞制备方法，主要通过增殖步骤、筛选步骤及预增殖步骤完成宫血干细胞的制备工作。其中，由于培养基中加入特定的添加剂，因此使得制备出的宫血干细胞在保持了免疫抑制能力的同时，还提高了免疫抑制作用。

技术领域

本发明涉及再生医学技术领域，具体涉及一种宫血干细胞制备方法。

背景技术

众所周知，为了提供更安全且质量稳定的宫血干细胞，在培养过程中不产生或几乎没有异源性蛋白质污染的无血清培养基是合适的，已知宫血干细胞不仅免疫原性低，而且还影响各种免疫效应细胞。然而，免疫抑制剂的使用与诸如免疫抑制剂的副作用之类的问题有关。宫血干细胞具有免疫抑制能力，因此如果可以使用宫血干细胞，则不需要免疫抑制剂。因此，进行具有低异蛋白风险和合成培养基污染风险的无血清或低血清培养来生产具有免疫抑制能力的宫血干细胞，是非常有必要的。

发明内容

本发明提供一种宫血干细胞制备方法，其通过在培养基中加入特定的添加剂，完成了宫血干细胞的制备及培养过程，在保持了免疫抑制能力的同时，还提高了免疫抑制作用。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：一种宫血干细胞制备方法，其特征在于包括以下步骤：

增殖步骤，包括在含有成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子-β的第一无血清培养基中增殖宫血干细胞；所述第一无血清培养基内还包含转化生长因子-β、干细胞生长因子、表皮细胞生长因子、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸；

筛选步骤，从增殖步骤中增殖的宫血干细胞中筛选保持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞；

预增殖步骤，包括在含有成纤维细胞生长因子、血小板衍生因子、表皮细胞生长因子、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸的另一无血清培养基中培养宫血干细胞，所述无血清培养基不含有干细胞生长因子和转化生长因子-β；

所述预增殖步骤和增殖步骤的培养时间为48天到68天，所述细胞制剂包括保持或改善免疫抑制能力的宫血干细胞；其中，在预增殖步骤中，宫血干细胞至少传代培养一次。

优选的，在筛选步骤之前，还包括以下步骤：血清培养步骤，包括在含有血清的培养基中培养经过增殖步骤的宫血干细胞。

优选的，包括从在增殖步骤中增殖的宫血干细胞中筛选不具有致瘤性的宫血干细胞。

优选的，增殖步骤中，通过使用适合于宫血干细胞增殖的培养血管来增殖宫血干细胞。

优选的，所述无血清培养基在增殖步骤中进一步包含细胞粘附分子。

优选的，宫血干细胞在增殖步骤中至少传代培养一次。

优选的，在增殖步骤中，传代培养的方式是使用不包含来自哺乳动物或微生物的成分的细胞去除剂来剥离宫血干细胞。

优选的，还包括：选择适合宫血干细胞增殖的培养血管的步骤。

优选的，磷脂选自磷脂酸、溶血磷脂酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油。

优选的，所述脂肪酸选自亚油酸、油酸、亚麻酸、花生四烯酸、肉豆蔻酸、棕榈油酸、棕榈酸和硬脂酸。