[发明专利]一种山茱萸中多糖成分的检测方法

说明书

本发明公开了一种山茱萸中多糖成分的检测方法，属于生物化学分析技术领域。该检测方法包括以下步骤：先对山茱萸的果肉依次进行烘干、粉碎、脱脂、水浴提取、醇沉、透析、冷冻干燥处理后，得到山茱萸多糖样品；接着，将山茱萸多糖样品溶于TFA水溶液中进行水浴水解后，得到样品溶液；然后，将样品溶液、NaOH溶液和PMP甲醇溶液进行混合后，再进行萃取，得到衍生化样品；最好，将衍生化样品使用HPLC‑UV法即可对山茱萸中的多糖成分进行分析。本发明提供的检测方法，可以从山茱萸果肉中分离出较高含量的多糖成分；另外，该检测方法可以对山茱萸中多糖成分进行定性和定量分析，其灵敏度高、准确性高、操作简便，且色谱峰分离较好。

技术领域

本发明涉及生物化学分析技术领域，具体是一种山茱萸中多糖成分的检测方法。

背景技术

山茱萸的干燥成熟果肉中，含有糖类、有机酸类、酯类及鞣质类等成分，是一种名贵的中药材。其中，多糖是山茱萸中的重要组成成分。

然而，由于糖类自身的特点，故不易将山茱萸中的多糖进行分离，从而不易对山茱萸中的多糖成分进行检测和分析。另外，在糖类的分析中，虽然高效液相色谱法(HighPerformance Liquid Chromatography，HPLC)具有高效、稳定、精确的优点，但是目前使用HPLC技术对山茱萸中多糖成分的分析，存在用时长、不易进行定量分析、准确性较差等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种山茱萸中多糖成分的检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种山茱萸中多糖成分的检测方法，包括以下步骤：

(1)取山茱萸的果肉进行烘干，去除果肉中的水分；

(2)将烘干后的果肉进行粉碎后，再添加乙醇水溶液依次进行水浴回流脱脂、冷却、抽滤和晾干处理，得到山茱萸粉末；

(3)将山茱萸粉末与超纯水混合，并进行超声处理后，再进行水浴提取，得到多糖提取液；

(4)将多糖提取液进行抽滤和减压蒸发后，再加入无水乙醇进行醇沉处理，得到沉淀物；

(5)用超纯水溶解沉淀物，并进行反复冻融和离心处理，得到无蛋白清液；

(6)将无蛋白清液置于透析袋中进行透析处理后，再进行冷冻干燥，得到山茱萸多糖样品；

(7)将山茱萸多糖样品溶于三氟乙酸(Trifluoroacetic Acid，TFA)水溶液中进行水浴水解后，再进行离心处理，得到水解清液；接着，将水解清液的pH值调到6～7，得到样品溶液；

(8)将样品溶液、NaOH溶液和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone，PMP)甲醇溶液进行混合后，再进行水浴加热处理，并添加酸溶液进行中和，得到中性溶液；

(9)往中性溶液中加入有机溶剂进行萃取，取水相，得到衍生化样品；

(10)将衍生化样品使用HPLC-紫外线(Ultraviolet，UV)法进行测试，得到衍生化样品的色谱图，根据衍生化样品的色谱图对山茱萸中的多糖成分进行分析。

本发明实施例采用的一种优选方案，所述的步骤(2)中，水浴回流脱脂处理的温度为70～80℃。

本发明实施例采用的另一种优选方案，所述的步骤(2)中，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为90％～95％。

本发明实施例采用的另一种优选方案，所述的步骤(3)中，水浴提取的温度为80～85℃。

本发明实施例采用的另一种优选方案，所述的步骤(6)中，冷冻干燥的温度为-20～-15℃。