[发明专利]一种全血前处理试剂及其应用

说明书

本申请属于临床检测技术领域，公开了一种全血前处理试剂及其应用，尤其是涉及在环孢素A和他克莫司的血药浓度免疫检测中的应用。本发明所述全血前处理剂包括有机溶剂、二价金属盐、表面活性剂和生理盐水，所述有机溶剂为甲醇和乙二醇。相对于现有技术，本发明至少具有如下有益效果之一：1)本发明全血前处理剂在应用有机溶剂的情况下，有效降低血红蛋白对HRP检测系统带来的干扰，保证检测结果的准确性；2)在全血前处理剂中首次应用溶血效果较好的表面活性剂，确保单支样本处理全过程能在10分钟以内完成；3)与现有的全血预处理剂相比，处理后的样本在与LC/MS的一致性不变的前提下，重复性有相应的提升。

技术领域

本发明属于临床检测技术领域，具体涉及一种全血前处理试剂及其应用，尤其是涉及在环孢素A和他克莫司的血药浓度免疫检测中的应用。

背景技术

血药浓度监测是以药代动力学原理为指导，分析测定药物在血液中的浓度，用以评价疗效或确定给药方案，使给药方案个体化，以提高药物治疗水平，达到临床安全、有效、合理的用药。血药浓度监测通常用于治疗窗窄、毒性强、服药周期长、服药后个体差异大的药物。

环孢素A(CsA)是1970年从孢子木霉菌中分离得到的不溶于水的环状十一肽，1976年瑞士山德士药厂首次发现并报告它具有免疫抑制作用。二十世纪70年代末期环孢霉素首次用于肾移植病人的治疗，这是移植药物研究的一项重要进步，明显增加了心、肾、肝、胰腺、肺或骨髓移植病人的生存率。1983年环孢素A被FDA批准用于器官移植患者术后免疫治疗。环孢素A可通过静脉或口服给药，它具有高度的亲脂性，胃肠道吸收不完全。环孢素A具有多样性和不可预知性，约50％存在于红细胞内，50％存在于血浆，血浆内约90％的环孢霉素与蛋白相结合。CsA血药浓度受药物相互作用、胃肠功能、红细胞含量、性别、年龄、食物及术后时间能因素的影响。CsA血药浓度过高容易引起肝肾及中枢神经系统毒性，其血药浓度过低则易引起排斥反应后诱发自身免疫性疾病。因此临床需定期检测CsA血药浓度，以提高疗效、减少不良反应。

他克莫司是1984年由筑波链霉菌发酵纯化分离出的，是23元大环内酯类免疫抑制剂，高度亲脂性药物。他克莫司主要用于肝或肾移植术后的移植物排斥反应，也有文献报道其用于肾病综合征、剥脱性唇炎、红斑狼疮等疾病。他克莫司在体内与环孢素A类似，与结合蛋白有较强的亲和力，且存在于红细胞内。两者均可通过抑制钙调蛋白依赖的蛋白磷酸酶，抑制活化T细胞核因子(NF-AT)活性，从而降低IL-2的转录水平，抑制T细胞活化而发挥免疫抑制作用。药物本身和其代谢产物都具有一定的毒性，所以进行血药浓度检测是其使用的一个必备前提。

环孢素A和他克莫司是临床上常用的一类免疫抑制剂，由于该药物在患者摄入体内后有一部分药物会进入到血液的红细胞内，并且该类药物会在血浆和红细胞内互相转换，而且容易受外部环境影响，所以常用的免疫检测方法均会使用全血样本进行检测。全血样本为非均质样本，在实际工作中，一般需要对全血样本进行前处理。全血前处理常用的方法有有机溶剂法和酶法。

有机溶剂法是提取药物过程中常用的操作方法，可以有效提取全血中的环孢素A和他克莫司。最常使用的有机溶剂包括甲醇、二甲基亚砜、乙腈等，这些溶剂可以使蛋白变性并且释放出药物。有机溶剂法操作简单，但只适用于样品中浓度较高的药物测定；且处理后，样品中仍然会存在很多干扰物质，对结果产生干扰；残余的杂质会堵塞色谱柱，污染仪器。而酶法反应温和，体系中无挥发性及难闻气味；无需离心，不需要增添设备，可自动化操作。但酶法的水解酶的蛋白水解作用可能对免疫体系存在影响。而且反应时间较长，一般需要进行高温蛋白变性过程，以减弱蛋白酶对后续免疫检测体系的影响。因此需要对全血前处理试剂进行进一步的优化。

发明内容

基于此，本发明的目的在于针对现有技术中的全血前处理试剂处理时间长，操作繁琐，处理不彻底的问题，提供一种全血前处理试剂及其应用，以快速处理全血样品，达到快速、准确的进行血药浓度检测目的。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：