[发明专利]识别细极链格孢菌的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株AtG7

说明书

本发明公开了一种识别细极链格孢菌Alternaria tenuissima的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株，所述识别细极链格孢菌的单克隆抗体，由保藏编号为：CCTCC No：C2019229的杂交瘤细胞株分泌产生；所述杂交瘤细胞株命名为AtG7，于2019年10月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No：C2019229。该单克隆抗体被用于由细极链格孢菌侵染引发的动植物病害的鉴定、动态监测以及细极链格孢菌的生物学研究，通过BaL b/c小鼠腹腔注射该细胞株，即可获得大量的该单克隆抗体，与多克隆抗体相比，具有纯度高，专一性强，重复性好等优点。

技术领域

本发明属于动物领域，特别涉及一种识别细极链格孢菌的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株AtG7。

背景技术

半知菌亚门链格孢属真菌细极链格孢菌Alternaria tenuissima是贝母黑斑病的病原真菌之一。病菌以菌丝随病残组织遗落在土中越冬，第二年再次侵染贝母。细极链格孢菌也是众多农作物的黑斑病的致病菌，每年给农业生产造成严重损失。而链格孢属真菌种类繁多，近缘种的菌落、菌丝和孢子形态相似，难以依靠上述特征加以区分。本发明公开的针对细极链格孢菌的单克隆抗体(单抗)结合酶联免疫吸附试验(ELISA)由于具有灵敏度高、特异性强、适于大量检测田间细极链格孢菌的特点，为应用该抗体进行细极链格孢菌的鉴定和生物学研究，由细极链格孢菌感染的病害如浙贝母黑斑病等的发生动态监测奠定基础。

发明内容

本发明提供了一种识别细极链格孢菌的单抗体，由保藏编号为：CCTCC No：C2019229的杂交瘤细胞株分泌产生。

本发明还提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株AtG7，于2019年10月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，中国武汉市武汉大学，保藏编号为：CCTCC No：C2019229。

本发明具有如下有益效果：

(1)单抗的特异性强：该单抗与细极链格孢菌抗原反应强，且不与链格孢菌、尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、木贼镰刀菌、半裸镰刀菌、灰葡萄孢菌、茎点霉菌、拟茎点霉菌的抗原发生反应，可用于细极链格孢菌及其引发的浙贝母黑斑病的检测。

(2)单抗的检测灵敏度高：采用间接ELISA检测结果表明，该单抗对细极链格孢菌菌丝及孢子制备的抗原的检测灵敏度为12.21ng/mL(即每孔1.221ng)，具有良好的开发应用前景。

(3)单抗的类型为IgG2a。

(4)单抗结合的目标蛋白单一：该单抗仅与细极链格孢菌约148kDa的抗原蛋白结合。

(5)浙贝母提取液对单抗的检测灵敏度无影响：该单抗对浙贝母蛋白提取液无存在交叉反应；在细极链格孢菌菌丝及孢子制备的抗原中加入浙贝母蛋白提取液后，浙贝母提取液对单抗的检测灵敏度无影响，为12.21ng/mL(即每孔1.221ng)，具有良好的开发应用前景。

附图说明

图1AtG7的效价检测；

图2AtG7与不同真菌抗原的反应；

图3AtG7的检测灵敏度测定；

图4AtG7抗体的类型及亚类鉴定；

图5AtG7结合的目标蛋白检测；

图6浙贝母提取液对AtG7的检测灵敏度的影响。

具体实施方式

以下结合附图和实施实例进一步解释本发明。

实施例1：杂交瘤细胞株制备