[发明专利]一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒

权利要求书

1.一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒，包括PCR反应缓冲液，其特征在于：PCR反应缓冲液原料按重量份比包括：dNTp混合物3-5份、氯化镁溶液2-4份、DNA聚合酶1-3份、Taq酶1-3份、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液2-4份、硫酸铵4-6份、三氮化钠2-4份、去离子水5-7份。

2.根据权利要求1所述的一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒，其特征在于：PCR反应缓冲液原料按重量份比包括：dNTp混合物3份、氯化镁溶液2份、DNA聚合酶1份、Taq酶1份、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液2份、硫酸铵4份、三氮化钠2份、去离子水5份。

3.根据权利要求1所述的一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒，其特征在于：PCR反应缓冲液原料按重量份比包括：dNTp混合物5份、氯化镁溶液4份、DNA聚合酶3份、Taq酶3份、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液4份、硫酸铵6份、三氮化钠4份、去离子水7份。

4.根据权利要求1所述的一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒，其特征在于：PCR反应缓冲液原料按重量份比包括：dNTp混合物4份、氯化镁溶液3份、DNA聚合酶2份、Taq酶2份、三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液3份、硫酸铵5份、三氮化钠3份、去离子水6份。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为耐热DNA聚合酶，并且耐热DNA聚合酶中的酶活性为2-8U/μL，耐热DNA聚合酶为化学修饰的热启动耐热DNA酶、抗体修饰的热启动耐热DNA酶中的一种或多种组合。

6.根据权利要求1-4任意一项所述的一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒，其特征在于：所述Taq酶为实时热启动Taq酶，实时热启动Taq酶通过噬菌体与胰蛋白酶和碳酸氢铵混合得到酶解液，将酶解液超滤得到含有亲和配体肽的滤液，再将滤液稀释至1000倍，稀释滤液与普通的Taq酶1：1混合得到实时热启动Taq酶。

7.根据权利要求1-4任意一项所述的一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒，其特征在于：所述三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液的浓度为8mol/L，并且三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液的pH＝8.8。

8.根据权利要求1-4所述的一种检测Eps8基因表达水平的试剂盒，其特征在于：PCR反应缓冲液制备方法具体包括以下步骤：

S1、将dNTp混合物、氯化镁溶液、DNA聚合酶与三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液混合得到混合液，所得混合液置于45℃水浴中，使用玻璃搅拌棒对混合液进行搅拌，搅拌速率为150r/min匀速搅拌，搅拌时间为30分钟；

S2、向混合液中加入Taq酶，继续对混合液进行搅拌，搅拌速率为50r/min匀速搅拌，搅拌时间为15分钟；

S3、将混合液冷却至25℃，向混合液中加入硫酸铵与三氮化钠，同时加入去离子水，搅拌速率为100r/min匀速搅拌，搅拌时间为20分钟，静置5分钟得到PCR反应缓冲液。