[发明专利]同时检测人血清的维生素A和25-羟基维生素D的方法

说明书

本发明涉及一种同时检测人血清的维生素A和25‑羟基维生素D的方法，包括如下步骤：标准溶液的制备；混合内标液的制备；待测样品的制备：于所述标准溶液和待测人血清样本中加水混合，然后加入所述混合内标液，进行蛋白沉淀；以正己烷进行萃取，取上层萃取液，去除溶剂后再复溶，分别得到待测标准样品和待测人血清样品；将所述待测样品注入液相色谱串联质谱仪进行检测。该方法能兼顾25‑羟基维生素D的灵敏度和维生素A的高浓度样本检测器信号饱和的问题，实现人血清的维生素A和25‑羟基维生素D的同时检测，检测效率高成本低，且检测结果准确，无相对基质效应。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别是涉及同时检测人血清的维生素A和25-羟基维生素D的方法。

背景技术

维生素A(vitamin A)又称视黄醇(retinol)或抗干眼病因子，是一个具有脂环的不饱和一元醇，包括动物性食物来源的维生素A1、A2两种，是一类具有视黄醇生物活性的物质。

维生素D是一种脂溶性的类固醇衍生物，包括动物来源的维生素D3(胆钙化醇)和植物来源的维生素D2(麦角钙化醇)。25-羟基维生素D是血清多种维生素D代谢产物中含量最多、最稳定且半衰期最长的一种，是反映体内维生素D水平的良好指标，其血清水平可代表机体维生素D营养状态。

维生素A和25-羟基维生素D在体内含量相差较大，若同时进行检测，较难兼顾25-羟基维生素D的灵敏度和维生素A的高浓度样本检测器信号饱和的问题。因此，目前维生素A和25-羟基维生素D，需进行两次前处理和两次上机检测，其中，维生素A主要采用高效液相色谱法检测，25-羟基维生素D采用高效液相色谱串联质谱法检测。

有方法尝试采用高效液相色谱串联质谱法同时检测血液中维生素A和25-羟基维生素D的方法，但该方法难以准确反应样品中维生素A和25-羟基维生素D含量，其主要原因在于：

1)所使用的校准曲线基质与样本基质不一致，校准曲线未与样本同样进行前处理，方法中也未提及基质效应相关的验证，而生物基质中存在一些内源性物质，如磷脂、盐类、蛋白等干扰离子化过程，可能会对高效液相色谱串联质谱法产生离子抑制或离子增强影响，即基质效应，基质效应会影响方法的准确性，是液相色谱质谱法结果不准确的主要因素之一；

2)维生素A、25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3 3种化合物并未实现色谱分离。

因此，如何提供一种能同时检测人血清的维生素A和25-羟基维生素D，且检测结果准确，无基质效应的方法是亟待解决的技术问题。

发明内容

基于此，本发明提供一种同时检测人血清的维生素A和25-羟基维生素D的方法。该方法能兼顾25-羟基维生素D的灵敏度和维生素A的高浓度样本检测器信号饱和的问题，实现人血清的维生素A和25-羟基维生素D的同时检测，检测效率高成本低，且检测结果准确，无相对基质效应。

一种同时检测人血清的维生素A和25-羟基维生素D的方法，包括如下步骤：

标准溶液的制备：分别取维生素A标准品、25-羟基维生素D2标准品和25-羟基维生素标准品，以溶剂溶解后，加入牛血清白蛋白的水溶液配制成不同浓度的溶液，得到标准溶液；

混合内标液的制备：取维生素A内标物、25-羟基维生素D2内标物和25-羟基维生素D3内标物，以溶剂溶解，得到混合内标液；

待测样品的制备：于所述标准溶液和待测人血清样本中加水混合，然后加入所述混合内标液，进行蛋白沉淀；以正己烷进行萃取，取上层萃取液，去除溶剂后再复溶，分别得到待测标准样品和待测人血清样品；