[发明专利]一种瓜氨酸原料中瓜氨酸含量的检测方法

说明书

本发明涉及生物分析领域，具体讲，涉及一种瓜氨酸原料中瓜氨酸含量的检测方法。本发明采用高效液相色谱法，将瓜氨酸原料的溶液注入高效液相色谱仪中，采用C18柱分离，紫外吸收检测器进行检测。本发明不需要对检测样品进行柱前或者柱后衍生化处理，极大缩短检测时间，检测结果更加准确。本发明使用得色谱柱为普通C18柱，检测器为紫外检测器，色谱条件简单，检测成本低、操作简便，适于大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及生物分析领域，具体讲，涉及一种瓜氨酸原料中瓜氨酸含量的检测方法。

背景技术

瓜氨酸(Citrulline)又称(S)-2-氨基-5-脲基戊酸或氨甲酰鸟氨酸，其分子式为C₆H₁₃N₃O₃，分子量为175.19。L-瓜氨酸是一种天然非蛋白质氨基酸，其在西瓜中含量丰富。它是尿素循环的组成部分并起着重要的作用。当L-瓜氨酸进入血流时，它可以转化为L-精氨酸和一氧化氮。一氧化氮可调节血管舒张功能，低L-瓜氨酸含量来调节机体疲劳和性功能障碍。L-瓜氨酸还能保持皮肤健康，保护肝脏。

近年来国外的众多研究表明，瓜氨酸还具有很多重要的生理功能，如清除自由基、稳定血压以及诊断类风湿关节炎、抗氧化等。瓜氨酸因其独特的药理作用，正被广泛应用于各个行业，与此同时人们对瓜氨酸原料的质量也越来越重视。但检索相关文献及专利未发现针对瓜氨酸原材料，建立检测方法。因此，很有必要建立一种测定原料中瓜氨酸含量的方法。

检索发现高效液相色谱法、氨基酸分析法、双波长薄层扫描法及分光光度法纸常用于检测瓜氨酸。这些方法存在较多问题，可行性较差。如氨基酸自动分析法，存在样品前处理时间长，样品走针时间长，试剂配制要求高等问题，这些问题严重制约了样品的检测效率。分光光度法，利用显色原理，间接检测原料中瓜氨酸的含量。该方法存在显色时间长、检测结果重现性和准确性差、检测结果不能直接反映原料中瓜氨酸含量、检测效率低等缺点。而双波长薄层扫描法也是建立茚三酮试液显色的基础上，该方法同样存在很大缺陷。

色谱法是目前常用的检测方法。在相关论文或文献例如：“瓜氨酸制备方法的研究(牟昳，北京化工大学，2004)”、“PITC柱前衍生-液相色谱法测定西瓜中L-瓜氨酸含量(李志坚、李高阳、张群等，食品工业科技，2013)”以及“鸟氨酸、瓜氨酸的HPLC测定方法优化(曾鸿、臧诗蕾、董芳蕊等，广东化工，2017)”中，均采用柱前衍生法，将样品瓜氨酸衍生化处理后，再进行高效液相色谱检测。该方法衍生步骤繁琐，操作不便。此外，衍生产生了许多副产物，使得色谱图难以分离，进而影响了瓜氨酸定量分析的准确性。且衍生试剂种类繁多，筛选困难，衍生试剂价格昂贵，检测成本高，不适用于多样品的检测。

专利号为CN201810738884.9(发明名称为一种L-瓜氨酸的高效液相检测方法)的专利，所采用的色谱柱为氨基键合硅胶柱，检测成本高，且该方法流动相大量使用色谱纯，使色谱柱的使用寿命受到损害。

因此，针对上述问题，迫切需要建立一种准确、快速、低成本、可行性高的方法来检测原料中瓜氨酸含量。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的发明目的在于提供一种瓜氨酸原料中瓜氨酸含量的检测方法。

为了实现该发明目的，采用的技术方案为：

本发明提出一种瓜氨酸原料中瓜氨酸含量的检测方法，

所述检测方法至少包括以下步骤：

(1)分别配制对照品溶液和供试品溶液，所述供试品溶液中含有瓜氨酸原料；

(2)检测：采用高效液相色谱法，分别取所述对照品溶液和所述供试品溶液注入高效液相色谱仪中，采用C18柱分离，利用紫外检测器检测瓜氨酸吸收峰，通过外标法计算得到所述供试品溶液中瓜氨酸的含量；