[发明专利]一种嗜血杆菌鉴定药敏试验卡及其制备方法

权利要求书

1.一种嗜血杆菌鉴定药敏试验卡，其特征在于，所述嗜血杆菌鉴定药敏试验卡包含鉴定孔和抗生素药敏孔；其中，所述鉴定孔包括：葡萄糖利用试验、甘露糖利用试验、尿素酶试验、β-半乳糖苷酶试验、硫化氢试验、X因子生长试验、V因子生长试验、X因子+V因子生长试验8个试验孔；所述抗生素药敏孔包含氨苄西林检测孔、β-内酰胺酶检测孔。

2.根据权利要求1所述的嗜血杆菌鉴定药敏试验卡，其特征在于，所述嗜血杆菌包含流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌和埃及嗜血杆菌。

3.根据权利要求1所述的嗜血杆菌鉴定药敏试验卡，其特征在于，所述葡萄糖利用试验、甘露糖利用试验、尿素酶试验包含以下组成：15-45μg/mlβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠、15-45μg/ml氯化高铁血红素、10-30g/L试验底物、0.5-2μg/ml两性霉素B、0.5-2ug/ml替考拉宁、营养物质、0.05-0.2g/L溴甲酚紫或0.03-0.07g/L酚红；其中，所述试验底物为葡萄糖或甘露糖或尿素。

4.根据权利要求1所述的嗜血杆菌鉴定药敏试验卡，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶试验、硫化氢试验包含以下组成：15-45μg/mlβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠、15-45μg/ml氯化高铁血红素、1-30g/L试验底物、营养物质、0.5-2μg/ml两性霉素B和0.5-2ug/ml替考拉宁，其中，所述β-半乳糖苷酶试验底物为2-硝基苯-β-D-半乳糖苷，所述硫化氢试验底物为硫代硫酸钠和硫酸亚铁。

5.根据权利要求1所述的嗜血杆菌鉴定药敏试验卡，其特征在于，所述X因子生长试验孔包含以下组成：15μg/ml氯化高铁血红素、0.5-2μg/ml两性霉素B、0.5-2ug/ml替考拉宁和营养物质；优选地，所述V因子生长试验孔包含以下组成：15μg/mlβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠、0.5-2μg/ml两性霉素B、0.5-2ug/ml替考拉宁和营养物质。

6.根据权利要求1所述的嗜血杆菌鉴定药敏试验卡，其特征在于，所述X因子+V因子试验孔包含以下组成：15μg/ml氯化高铁血红素、15μg/mlβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠、0.5-2μg/ml两性霉素B、0.5-2ug/ml替考拉宁和营养物质。

7.根据权利要求3-6中任一项所述的嗜血杆菌鉴定药敏试验卡，其特征在于，所述营养物质包含以下组成：5-20g/L牛肉粉、5-20g/L酵母粉、5-50g/L酪蛋白水解物、5-20g/L胰蛋白胨中的一种或多种的组合。

8.根据权利要求1所述的嗜血杆菌鉴定药敏试验卡，其特征在于，所述氨苄西林检测孔包含2个试验孔，包含以下成分：5-20g/L牛肉粉、10-50g/L酪蛋白水解物、15-45μg/ml氯化高铁血红素、15-45μg/mlβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠、0.5-2μg/ml两性霉素B、0.5-2ug/ml替考拉宁和1μg/ml或2μg/ml氨苄西林；优选地，所述β-内酰胺酶检测孔包含以下成分：0.1-1mg/ml头孢硝噻吩、40％-95％pH为7.0的0.1M PBS缓冲液、5％-60％DMSO，所述百分比为体积百分比。

9.权利要求1-8任一项所述嗜血杆菌鉴定药敏试验卡的制备方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：

(1)将所述鉴定孔和药敏孔液体试剂采用0.22μm过滤膜过滤除菌；

(2)将完成除菌的鉴定和药敏溶液添加至无菌空白试验卡的孔中，每孔30-200μl；

(3)将完成加样的试验卡进行干燥；

(4)真空包装；

优选地，所述步骤(3)中干燥是采用冷冻干燥的方式；所述步骤(4)中真空包装是采用铝膜袋进行真空包装。

10.权利要求1-8任一项所述嗜血杆菌鉴定药敏试验卡的使用方法，其特征在于，所述试验卡使用时，采用无菌生理盐水将菌液浓度调整至1-2*10⁸CFU/ml并添加于葡萄糖利用试验、甘露糖利用试验、尿素酶试验、β-半乳糖苷酶试验、硫化氢试验、β-内酰胺酶检测孔中，采用无菌生理盐水将菌液浓度调整至5*10⁵CFU/ml并添加于X因子生长试验、V因子生长试验、X因子+V因子生长试验、氨苄西林检测孔中，每孔30-200ul，盖上盖板20-24h后通过各试验孔的颜色变化或者浊度变化观察试验结果。